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黄芪遗传转化受体系统的建立及aFGF转化黄芪的研究
目的:建立黄芪的高频再生体系,并在其基础上建立aFGF转化黄芪的体系.方法:以黄芪的子叶节为外植体通过器官发生途径建立高频再生体系,采用农杆菌GV3101转化黄芪子叶节,将aFGF基因导入黄芪,再生株系经过PCR初步检测.结果:以全部子叶节为外植体,在培养基为MS+2.0 mg·L~(-1) BA+0.5 mg·L~(-1) IBA诱导不定芽;在培养基为1/2M+5.0mg·L~(-1) NAA生根,获得高频再生体系;全部子叶节在培养基上预培养3 d,农杆菌浓度为A_(600)0.3时侵染10 min后共培养2d,转移至筛选培养基培养,检测证实aFGF基因整合到黄芪基因组中.结论:在黄芪子叶节高效再生体系基础上,建立黄芪遗传转化受体体系,为黄芪作为植物生物反应器的研究奠定了基础.
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红花遗传转化受体系统的建立及转酸性成纤维细胞生长因子aFGF的初步研究
目的:将aFGF与红花的油体蛋白融合,转入红花中,直接通过提取红花油来实现红花与aFGF的双重功效.方法:以不同日龄的红花子叶为外植体,采取正交试验设计的方法,摸索出红花再生体系的佳条件.然后通过农杆菌介导法将aFGF基因转入到红花中,对不同浓度的抗生素进行筛选,进行PcR鉴定,计算阳性率.结果:根据不同的激素配比,确定了红花分化的佳培养摹为MS+BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA0.2 mg·L~(-1);生根的适培养基为1/4 MS+N从2.0 mg·L~(-1)+IAA 0.5 mg·L~(-1).3种不同种类和浓度的抑菌抗生素对红花浸染后的抑菌效果略有不同,结合抑菌效果,污染率,芽的分化率以及成本问题等因素的综合考虑,抑菌抗生素选择用Tim,质量浓度为400 mg·L~(-1)即可抑制细菌的生长,同时有利于芽的分化;hyg的筛选压力则选择6 mg·L~(-1)为它的临界浓度;对8棵转化植株进行鉴定,阳性率为25%.结论:通过器官发生途径,确定出红花分化与生根的佳激素组合与配比,建立了红花的再生体系;确定出适的抑菌抗生素与筛选抗生素的浓度;经过筛选获得的再生植株,通过PCR检测,部分扩增出aFGF目的基因,证实了aFGF基因整合到红花基因组中.这为红花作为植物生物反应器的研究奠定了扎实的基础.
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酸性成纤维细胞生长因子对颈动脉窦损伤的保护及量效关系的探讨
目的探讨酸性成纤维细胞因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)对大白鼠颈动脉窦损伤的保护作用以及量效关系.方法将大白鼠随机分成对照组,实验组中的aFGF1组、aFGF2组、aFGF3组各8只.实验组大鼠分别经静脉注射0.14μg/ml,0.43μg/ml,1.30gμ/ml的aFGF,对照组注射同剂量的生理盐水.20min后,用蘸有80%乙醇的棉球轻轻擦试颈动脉窦区,以损伤颈动脉窦压力感受器神经末梢,并放置10min,观察记录各组损伤前后夹闭颈总动脉时收缩压(SP)、舒张压(DP)、平均动脉压(MP)和心率(HR)的变化.结果①损伤颈动脉窦前,夹闭右颈总动脉,实验组和对照组血压均升高,夹闭前后相比差异显著(P＜0.01).②损伤右颈总动脉窦后,夹闭右颈总动脉,对照组血压不变,夹闭前后相比差异不显著(P＞0.05);实验组的aFGF1组、aFGF2组、aFGF3组血压均升高,夹闭前后比差异显著(P＜0.05),夹闭前后的血压差分别与对照组的差值相比均显著(P＜0.05),但未呈现明显的量效关系.在本实验中,HR均无明显变化.结论 aFGF对大白鼠颈动脉窦损伤有保护作用.
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生长因子EGF、aFGF、bFGF对毛乳头细胞生长的研究
目的 研究生长因子EGF、aFGF、bFGF对体外培养人毛乳头细胞生长的调控作用.方法 获取人头皮外伤缝合术多余头皮组织,一步酶消化法获取人毛乳头细胞并将其贴壁培养,分为实验组和对照组.实验组在培养基中添加生长因子,而对照组培养基则不添加.采用细胞生物学技术,免疫荧光技术,CCK8细胞增殖实验,研究生长因子EGF、aFGF、bFGF对体外培养的毛乳头细胞增殖与干性表达影响.结果 在人毛乳头细胞体外培养中,实验组细胞生长比对照组增殖更加明显(P<0.05),干细胞阳性率更高.结论 生长因子EGF、aFGF、bFGF能促进毛乳头细胞生长和维持干细胞特性.
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原位杂交技术测定放烧复合伤创面aFGF mRNA的表达
目的:探讨放烧复合伤创面愈合过程中aFGF的作用.方法:用SD大鼠制备深Ⅱ°烧伤、放烧复合伤模型,分别于模型后12 h和1、3、7 d取背部创面皮肤组织,采用原位杂交技术测aFGF mRNA的表达.结果:烧伤组大鼠在上述4个时相点aFGF mRNA表达明显增加,而放烧复合伤组仅在第7天有少量表达;aFGF mRNA的表达部位位于真皮及皮下.结论:提示aFGF有助于创伤的愈合;放烧复合伤创面愈合延迟与aFGF mRNA表达低下及延迟有关.
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酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化及活性鉴定
目的:从牛脑中分离纯化酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)并鉴定生物活性.方法:根据Denis GOSPODAROWICZ的方法,新鲜牛脑匀浆,三步硫酸铵盐析,后沉淀物溶解透析后予离子交换层析及琼脂糖凝胶亲和层析.促3T3细胞DNA合成率鉴定生物活性.结果:用1.0 mol/L NaCl的缓冲液洗脱得到分子量为13 600的多肽,得率为610 μg/kg牛脑.氨基酸组成分析与已知的aFGF相同.促3T3细胞DNA合成的低浓度为0.5 ng/ml,大效应浓度50 ng/ml,ED50值为8 ng/ml.结论:aFGF具有强烈的促细胞增殖作用.
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aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长及蛋白酶活化受体1的影响
目的 比较酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)对小鼠皮肤成纤维细胞增殖的作用以及对蛋白酶活化受体1(PAR1)的影响,探讨PAR1与促进成纤维细胞增殖的关系.方法 取出生3周体质量为15～20 g的MH小鼠皮肤进行成纤维细胞培养,采用MTT法测定细胞数和活度,免疫细胞学XTT法检测aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长的影响,RT-PCR法检测小鼠皮肤成纤维细胞中PAR1 mRNA的表达.结果 小鼠皮肤成纤维细胞健康生长,aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长的促进作用在实验组与对照组间有显著性差异(P＜0.05),其对成纤维细胞作用浓度梯度较为明显;小鼠皮肤成纤维细胞存在PAR1 mRNA的表达,且三种生长因子对其表达的影响有差异,以aFGF组表达显著.结论 aFGF、bFGF和EGF均能促进成纤维细胞增殖,以aFGF的促进作用强,PAR1可能参与成纤维细胞的增殖.
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改构型酸性成纤维细胞生长因子对白花丹素诱导的人胚肝细胞L-O2损伤的保护作用
目的 研究改构型酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对白花丹素引起的人胚肝细胞L-O2损伤的保护作用及机理.方法 用白花丹素体外诱导肝细胞损伤,同时用aFGF对肝细胞进行保护,测定培养上清液中的SOD,MDA,LDH值,MTT法测定肝细胞活性.结果 与损伤组比较,aFGF对白花丹素引起的胚肝细胞损伤有明显的保护作用(P＜0.05).结论 aFGF可保护肝细胞,其机制可能与其拮抗自由基产生有关.
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酸性成纤维细胞生长因子的基础与应用研究
原型aFGF是由154个氨基酸残基组成的相对分子质量是16.5×103的小蛋白质分子,等电点5～7,呈酸性,改构体aFGF(MaFGF)则是改变aFGF的结构,即切除1～25位的残基,保留26和27位但替换为蛋氨酸.原型aFGF具有两大类型的活性:其一,促有丝分裂活性,可促进组织细胞分裂、增殖;其二,非促有丝分裂活性,包括舒张血管、神经保护、心肌保护和局部缺血保护等.本文就aFGF的结构及其受体、生物学活性及应用基础研究、可能存在的负面效应以及MaFGF的特性等进行宗述.
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成年大鼠脑神经元aFGF基因mRNA表达
目的:为aFGF对成年大鼠脑内神经元的作用提供理论依据.方法:观察了成年大鼠脑内神经元mRNA表达分布情况.结果:成年大鼠脑皮质、海马、下丘脑和中脑神经元核内均有不同程度的aFGF基因表达.结论:aFGF在脑多个部位神经元的表达可能与神经元的存活和功能活动的维持有关.
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aFGF基因在大鼠脑皮质损伤神经元的表达
目的：为aFGF对成年大鼠脑损伤后脑内神经元的作用提供理论依据。方法：应用原位杂交和免疫组织化学方法观察了大鼠脑损伤后aFGF基因mRNA和蛋白在皮质神经元的表达变化。结果：脑损伤后15 min及30 min伤侧大脑皮质神经元aFGF mRNA和蛋白表达增加,aFGF mRNA表达于伤后6 h达高峰，持续至伤后24 h，以后表达逐步降低，于伤后72 h恢复至正常水平。神经元aFGF蛋白表达于伤后1 h达高峰，持续至伤后3 h，伤后24 h表达恢复正常。结论：脑损伤后皮质神经元aFGF基因表达增加与神经元抗损伤修复机制有关。
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aFGF透皮给药治疗缺血皮瓣的临床应用
目的:观察酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)透皮给药治疗反流轴型皮瓣血液循环障碍的疗效.方法:应用aFGF透皮给药治疗出现血液循环障碍的反流轴型皮瓣,观察皮瓣的转归.结果:自2006年以来在临床上应用11例,用药后皮瓣血液循环全部得到明显改善,存活良好.结论:应用aFGF透皮给药可明显改善反流轴型皮瓣的血液灌流,促进皮瓣成活.
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神经发生对小鼠学习记忆能力的影响
本研究探讨神经发乍对学习记忆能力的影响.选择健康成年昆明小鼠随机分7组,分别为牛理盐水对照组,酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)高、中、低剂量组,甲氨喋呤(MTX)高、中、低剂量组.使用脑立体定位仪行侧脑室埋管手术及侧脑室微量注射.用Morris水迷宫训练测试其空间学习与记忆能力;腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)后通过免疫组织化学方法来显示BrdU阳性细胞.结果表明,aFGF各剂量组学习记忆能力均强于生理盐水埘照组;MTX高剂量组学习记忆能力显著低于生理盐水对照组.免疫组织化学结果显示aFGF各剂量组齿状回内BrdU阳性细胞数目显著高于对照组;而MTX高剂量组齿状回BrdU阳性细胞较之显著减少.结果提示,aFGF和MTX可能通过促进或抑制齿状回的神经发生,从而影响小鼠的学习与记忆能力.
