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针刺调控Hsp84、Hsp86表达延缓快速老化痴呆小鼠SAMP8脑衰老作用的研究
目的 探讨热休克蛋白(Hsp)84、Hsp86与快速老化痴呆小鼠SAMP8(senescence accelerated mouse prone 8)脑衰老的相关性及针刺的调控作用.方法 取10只正常老化小鼠SAMR1(senescence accelerated mouse resistant 1)为正常对照组.另取30只SAMP8按照随机数字表法分为空白对照组、针刺组和非穴组,每组10只.针刺组给予“三焦”针法治疗,非穴组针刺双胁下两个固定非穴位点;其余两组给予等量的捉抓刺激;均每天1次,持续15天.评价动物神经肌肉协调性,检测海马氧化损伤及蛋白质羰基化水平;Real-time PCR和Western blot法检测海马及Neuro-2a细胞中Hsp84和Hsp86mRNA和蛋白表达情况.结果 与正常对照组比较,空白对照组紧绳实验成功率降低(P＜0.01),海马超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平下降(均P＜0.01),超氧阴离子和蛋白质羰基化水平升高(P ＜0.01,P＜0.05),海马Hsp84、Hsp86mRNA和蛋白呈低表达(均P＜0.01);与空白对照组和非穴组比较,针刺组紧绳实验成功率提高(P＜0.05);海马SOD和GSH-Px水平上升(P ＜0.05,P＜0.01),超氧阴离子和蛋白质羰基化水平降低(P ＜0.01,P＜0.05);海马Hsp84、Hsp86 mRNA和蛋白呈高表达(均P＜0.01).Aβ25-35处理后的Neuro-2a细胞中Hsp84和Hsp86 mRNA表达水平降低(均P＜0.01).结论 衰老后蛋白质氧化损伤增多及Hsp84和Hsp86表达下降是造成SAMP8脑内变性蛋白堆积和脑衰老的部分原因.针刺通过调控Hsp84和Hsp86表达延缓脑衰老.
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敦煌石室大宝胶囊对衰老大鼠血清白细胞介素-4、-10含量和海马区热休克蛋白86基因蛋白表达的影响
目的 观察以健脾补肾-涤痰祛瘀法为指导的敦煌石室大宝胶囊(DHDB)对衰老模型大鼠血清白细胞介素(IL)-4、IL-10含量和海马区热休克蛋白(HSP)86基因和蛋白表达的影响.方法 受试动物按随机数字表法分为空白组(n=10)和模型组(n=50).采用D-半乳糖(0.125 g/kg)皮下注射建立衰老模型并筛选符合衰老模型的大鼠,按随机数字表法分为模型组、DHDB高、中、低剂量组(0.8、0.4、0.2 g/kg)和阳性对照组(0.4 g/kg吡拉西坦),经药物干预后分别测定各组大鼠血清IL-4、IL-10含量和海马区HSP86基因和蛋白表达水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠学习能力下降,血清IL-4含量显著降低、IL-10含量显著增高,海马区HSP86基因和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);DHDB各剂量组大鼠学习能力提高,血清IL-4含量显著增高而IL-10含量显著降低,海马区HSP86基因和蛋白表达水平显著增高,且以高剂量DHDB作用为优(P<0.05).结论 DHDB具有提高衰老大鼠学习记忆能力,调节血清IL-4、IL-10含量正常分泌及促进海马区HSP86基因和蛋白表达的作用.
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恶性疟原虫热休克蛋白86(HSP86)基因置换型和插入型打靶载体的构建
目的对恶性疟原虫热休克蛋白基因进行体外扩增，构建HSP86基因打靶载体，利用基因敲除技术进行恶性疟原虫热休克蛋白基因功能的研究。方法恶性疟原虫体外培养，基因组DNA提取，目的基因扩增，载体与目的片段连接、阳性克隆筛选及酶切鉴定。结果经酶切鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符，进一步测序鉴定证实PCR产物及插入片段为所需目的基因片段。插入片段经酶切鉴定证实插入方向正确。结论成功构建了用于恶性疟原虫基因打靶的插入型及置换型载体(pHCl-HSP86int和pHCl-HSP86rep)，该打靶载体的成功构建为随后将进行的恶性疟原虫细胞内基因转染和进一步的功能研究奠定了基础。
