首页 > 文献资料
-
解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr狼疮小鼠肾组织GRα的调控作用研究
目的 探讨解毒祛瘀滋肾方对MRL/Ipr小鼠肾组织糖皮质激素受体信号通路的作用机制.方法 30只MRL/lpr小鼠随机分为模型组、西药组和中药组,另选10只昆明鼠作为正常对照组.HE染色分析小鼠肾组织病理改变;RT-PCR和Western blot分析糖皮质激素受体α(GRα)的表达；免疫共沉淀检测GRα与亲环素A结合力的影响.结果 两个用药组MRL/lpr小鼠肾损伤程度减轻.与模型组比较,西药组小鼠肾组织GRα mRNA及蛋白相对表达量降低,中药组两个指标增加,差异均有统计学意义(P＜0.01).解毒祛瘀滋肾方可显著提高GRα与亲环素A的结合力.结论 上调GRα的表达并增强GRα与亲环素A的相互作用是解毒祛瘀滋肾方能够改善小鼠肾组织病变作用机制之一.
-
特发性血小板减少性紫癜患者糖皮质激素受体的表达
目的探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者糖皮质激素治疗效应与外周血单个核细胞(PBMC)内两种糖皮质激素受体(GR)亚型-GRα和GRβ,及C-FOX表达水平之间的关系.方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测激素敏感型、激素抵抗型ITP患者和正常对照组GRα,GRβ,C-FOX的mRNA的表达.结果ITP患者和正常对照组均有GRα、cRβ,C-FOS mRNA的表达;激素抵抗型ITP患者GRβ mRNA表达明显高于激素敏感型ITP患者及正常对照组(P＜0.05);GRα,C-FOX mRNA在各组无显著差别.结论ITP患者糖皮质激素抵抗可能与GRβ的表达亢进有关.
-
儿童眼肌型重症肌无力外周血单个核细胞中糖皮质激素受体的表达分析
目的 重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种自身免疫性疾病(autoimmunity diseases,AID),在其他AID研究中发现糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达有异常,故有必要探讨儿童MG中GR表达情况.方法 对新发MG患儿43例及健康儿童19例留取新鲜血液,分离外周血单个核细胞(PBMC)选用RT-PCR法检测GRα、GRβ亚型mRNA表达水平;用免疫细胞化学法观察两组患儿PBMC中GRα、GRβ阳性细胞比例.结果 MG患儿GRα(0.639±0.253)、GRβ(0.508±0.153)阳性细胞比例较对照组(分别为0.344±0.097;0.315±0.127)明显升高(P<0.05),MG患儿GRα(0.698±0.155)、GRβ(0.587±0.236)mRNA表达水平较对照组(分别0.521±0.106;0.471±0.161)显著升高(P<0.05).结论 MG患儿PBMC中GRα、GRβ表达增高可能与GR功能异常有关,这可导致GR释放糖皮质激素(glucocorticoid,GC)受限,故GC的有效利用率下降,从而引起机体内环境紊乱.
-
单次地塞米松治疗对实验性脑出血后肺、脑组织的保护作用及机制
目的 研究单次地塞米松(Dex)治疗对脑出血(ICH)后肺、脑组织的保护作用及可能机制.方法 采用立体定向技术自体血尾状核注入法制备SD大鼠ICH模型,将大鼠分为假手术组、ICH模型组和Dex治疗组.采用HE染色观察血肿周围组织与肺组织的炎症反应情况,采用透射电镜观察各组肺组织超微结构变化.采用RT-PCR法半定量检测NF-кB p65 mRNA及糖皮质激素受体α(GRα)mRNA在脑与肺中的表达情况.结果 (1)ICH模型组脑水肿明显,血肿周围炎症反应重,肺组织损伤以间质性肺炎表现为主,肺泡结构破坏;Dex治疗组脑水肿较ICH模型组明显减轻,肺组织炎性反应减少.(2)NF-кB p65 mRNA表达,ICH模型组脑出血后血肿周围脑组织(0.44±0.08)和肺组织(0.69±0.16)均较假手术组(分别为0.27±0.05和0.26±0.04)增高(P<0.01),Dex治疗组脑(0.17±0.14)及肺(0.17±0.03)组织中NF-кB p65 mRNA均明显低于ICH模型组和假手术组(P<0.01);ICH模型组GRα mRNA表达水平,无论在脑组织(0.47±0.07)还是在肺组织(0.49±0.07)均低于假手术组(分别为0.64±0.03和0.65±0.13)(P<0.01),Dex治疗组脑组织(1.01±0.09)和肺组织(0.89±0.08)GRα mRNA表达较ICH模型组和假手术组均明显增强(P<0.01).结论 ICH后早期、单次给予Dex治疗可减轻脑组织损害,亦可明显改善继发肺损害,其可能作用机制为Dex提高了GRα mRNA水平并抑制NF-кB p65 mRNA表达.
-
解毒祛瘀滋阴中药对MRL/lpr小鼠中糖皮质激素受体α的影响
目的:观察解毒祛瘀滋阴中药对MBL/lpr小鼠脾及肾组织糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptor,GHα)蛋白表达的影响.方法:40只MRL/lpr小鼠随机分为模型组、西药组、中药组及中西药给合组,西药组强的松混悬液灌胃,中药组解毒祛瘀滋阴浓缩液灌胃.每组10只,另选10只清洁级正常小鼠为空白对照.采用Western blot及流式细胞术分别检测各组小鼠肾GRα蛋白表达及脾淋巴细胞GRα的蛋白表达和结合力变化.结果:肾组织GRα蛋白表达和脾脏GRα蛋白表达与结合力模型组比正常组显著降低(P<0.01),西药组较模型组降低,但无明显差异,中药组及中西药结合组与模型组相比显著升高(P<0.05),与正常组无明显差异.结论:解毒祛瘀滋阴中药及与强的松联合使用上调MRL/lpr小鼠中GRα的蛋白表达和结合力.
-
激素抵抗型儿童鼻息肉组织中糖皮质激素受体α表达下调分析
目的 探讨儿童鼻息肉组织中糖皮质激素受体蛋白GR α表达的差异性.方法 对46例儿童鼻息肉给予鼻喷布地奈德12周,依据鼻内镜下Lund-Kennedy评分不同分为激素抵抗组和激素敏感组,采用蛋白质印迹(Western blot)检测两组患儿鼻息肉组织中GR α蛋白表达.结果 激素抵抗组22例,激素敏感组24例,两组患儿鼻息肉组织中均有GR α受体表达,但激素抵抗组患儿鼻息肉组织中糖皮质激素受体α表达下调.结论 GR α表达量在激素抵抗型儿童鼻息肉组织中较低,GR α下调可能参与了儿童鼻息肉对糖皮质激素的抵抗.
-
掌跖脓疱病患者皮损糖皮质激素受体α和β表达的研究
目的:为了解掌跖脓疱病患者皮损中GR表达情况,我们利用免疫组化方法检测患者皮损和正常皮肤标本中GR-α和GR-β的表达,从而探讨其表达在发病中的作用.方法:选择25例临床诊断为掌跖脓疱病患者皮损,26例外科手术切取的健康皮肤作为正常对照.用免疫组化SP法(链酶卵白素—过氧化物酶法)检测掌跖脓疱病患者皮损与正常对照组皮肤GR-α、GR-β的表达数量和强度.结果:两组GR-α表达无显著差异,患者组GR-β表达阳性率及强度明显高于对照组.结论:GR-β在掌跖脓疱病的发病过程中起重要作用.
-
乌司他丁对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织糖皮质激素受体α和β表达的影响
目的 探讨乌司他丁对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺组织糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptor alpha,GRα)、糖皮质激素受体β(glucocorticoid receptor beta,GRβ)表达的影响.方法 将72只成年雄性SD大鼠随机分为3组:空白对照组(n=24)、脂多糖组(LPS组,n=24)和脂多糖加乌司他丁组(LU组,n=24),各组又分为4、8、12、24 h4个不同时间点,每个时间点各6只.LPS组腹腔注射LPS(5 mg/kg);LU组腹腔注射LPS(5 mg/kg)后,即刻腹腔注射乌司他丁(10万U/kg).各组补足生理盐水至腹腔注射总体积为1 ml.光镜下观察肺组织HE染色病理学变化;同时测定大鼠肺湿干重比(W/D);采用蛋白印迹分析技术检测GRα、GRβ的表达.以灰度值表示其相对表达水平.结果 病理检查证实大鼠ALI造模成功.在各时间点3组大鼠肺组织GRα、GRβ的表达:LPS组大鼠肺组织GRα表达水平均低于对照组(P均＜0.01),GRβ均高于对照组(P均＜0.01);LU组GRα表达水平均高于LPS组(P均＜0.05),但仍低于对照组(P均＜0.05),GRβ与GRα相反.LPS组内各时间点肺组织GRα、GRβ表达水平比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),GRα于8h降到低,然后递升;GRβ于8h达到高,然后递降.LU组内各时间点肺组织GRα、GRβ表达水平比较差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),随时间延长GRα表达递降,GRβ递增并于8h达到高,然后递降.结论 ALI大鼠GRα和GRβ在肺组织中的表达较正常肺组织有所改变,乌司他丁对ALI大鼠有保护作用,可能与其可调控GRα和GRβ的表达有关.
-
大鼠自身免疫性甲状腺炎中西药疗效与糖皮质激素受体的相关性研究
目的 慢性自身免疫性甲状腺炎为临床常见的甲状腺疾患,中医药在治疗本病时有独特优势.方法 自身免疫性甲状腺炎模型大鼠经由加味逍遥丸和优甲乐治疗后,2组疗效相比较,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测GRα、GRβ的表达.结果 中药治疗组的大鼠TgAb和TPOAb均显著下降;淋巴细胞浸润范围减小、程度减轻.各组均有GRα和GRβ蛋白表达,模型组GRα的表达量低于正常对照组;而GRβ的蛋白表达量及细胞核GRβ/GRα比值均高于对照组,提示在疾病过程中GRα为负性作用因子,GRβ为正性作用因子,经由中药干预后,调节免疫相关因子GRα和GRβ抑制自身免疫反应.结论 探讨GR基因表达在自身免疫性甲状腺炎发病机制中的作用,探究慢性甲状腺炎区别治疗的依据.
-
地塞米松对人羊膜上皮WISH细胞糖皮质激素受体α表达的影响
目的 观察地塞米松对体外培养人羊膜上皮WISH细胞糖皮质激素受体(GR)-α表达的调节.方法 将体外培养的WISH细胞分为不同浓度地塞米松(10-8、10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L)作用48 h组,和单一浓度地塞米松作用不同时间组(终浓度10-6mol/L,培养24、48、72 h).两组均设空白对照组.采用RT-PCR方法检测各组细胞中GR-a mRNA的表达.结果 在不同浓度地塞米松作用48 h后,10-4mol/L组细胞GRα mRNA表达强于空白组,其余各组细胞GR-α mRNA表达均弱于与空白组(P＜0.01).在地塞米松作用不同时间组,各亚组细胞GR-α mRNA表达与空白组相比,均明显减弱(P＜0.01).结论 低浓度地塞米松可下调WISH细胞中GR-α mRNA表达；高浓度地塞米松可上调GRα mRNA的表达.GR-α mRNA表达不随地塞米松作用时间的延长而下降.临床上常规剂量和疗程应用地塞米松促胎肺成熟时,不会导致促分娩发动作用.
-
GRα-GST融合表达载体的构建及重组蛋白的表达
[目的]构建GRα-GST融合表达载体并获得重组蛋白,以期为筛选类糖皮质激素样中药提供工具.[方法]运用RT-PCR扩增得到包含CDS的GRα基因序列后,经T-A克隆插入PMD-18载体.以此重组载体为模板扩增含有BamH I与Xho I酶切位点的GRαORF,插入pGEX-4T-1载体后形成了重组载体,并使其在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达融合蛋白,再用SDS-PAGE检测融合蛋白的表达.[结果]成功的将GRα-全基因构建入原核表达载体pGEX-4T-1中.测序结果表明载体构建成功,无插入和移码突变.经IPTG诱导后获得与预测大小(112kDa)完全一致的目的蛋白即GRα-GST融合蛋白.[结论]成功获得了含重组载体的大肠杆菌,并在IPTG诱导下较好的表达,得到了GRα-GST融合蛋白.
关键词： 糖皮质激素受体α 融合蛋白 原核表达 pGEX-4T-1载体 -
糖皮质激素受体与褪黑素受体在斑秃皮损中的表达
目的:检测斑秃(AA)患者皮损及健康头皮标本中糖皮质激素受体(GR)和褪黑素受体(MR)的表达.方法:用免疫组化法检测15例AA患者和16例正常对照组GR-α、GR-β、MR1的表达.结果:GR-α的表达在AA组明显强于健康组(P＜0.05);在毛囊生长期和静止期细胞中AA组GR-α的表达强于健康组(P＜0.01);GR-β在AA组与健康组的表达无统计学意义(P＞0.05);MR1在AA组表皮层表达弱于健康组(P＜0.05);在真皮间质炎细胞中AA组高于健康组,并与间质炎细胞分布关系密切(P＜0.05).结论:GR-α不仅在正常毛发生长中起着重要作用,而且通过对毛囊生长期和静止期的影响参与了斑秃的发生.
-
糖尿病神经病理性痛大鼠脊髓背角USP49和FKBP51的表达与作用
目的 研究泛素特异性蛋白酶49(USP49)和FK506结合蛋白51(FKBP51)在糖尿病神经病理性痛(DNP)大鼠脊髓背角中的表达及作用. 方法 SD雄性大鼠通过高糖高脂饮食饲养和腹腔注射1％链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型并按照随机数字表法分为DNP组、对照短发夹RNA(shRNA)组和USP49沉默组,每组10只.3组大鼠分别鞘内注射生理盐水、Ad-scrambledshRNA(3×108 PFU/mL)、Ad-USP49-shRNA(3× 108 PFU/mL).另取10只正常大鼠作为对照组,不做任何处理.分别于造模前1d、造模后1d、7d、鞘内注射后1、3、7d测定大鼠热缩足潜伏期(TWL)和机械缩足反应阈(MWT),并检测背角神经元USP49、FKBP51、糖皮质激素受体α(GRα)mRNA和蛋白的表达水平. 结果 (1)造模前1d,4组大鼠TWL差异无统计学意义(P＞0.05).鞘内注射后3d、7d,USP49沉默组TWL明显长于DNP组,短于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)造模前1d,4组大鼠MWT差异无统计学意义(P＞0.05).鞘内注射3d、7d后,USP49沉默组MWT明显高于DNP组,低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)与DNP组比较,USP49沉默组USP49mRNA、FKBP51 mRNA表达显著下降,GRα mRNA表达显著上升,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)与DNP组比较,USP49沉默组USP49蛋白、FKBP51蛋白表达明显降低,GRα蛋白明显上升,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 特异性沉默脊髓背角神经元USP49表达可改善DNP大鼠热痛敏反应和机械痛敏反应,其机制可能与USP49介导的FKBP51蛋白去泛素化有关.
-
JAB1、LPS对糖皮质激素受体转录激活活性的影响
目的体外观察JAB1基因转染对糖皮质激素受体转录活性的调控作用. 方法采用体外培养COS-7细胞,脂质体法共转染含全长人JAB1基因质粒pCDNA3.1-JAB1、pCMV-hGRα及含CAT报告基因质粒pMAMneo-CAT,设置不同剂量梯度的pCDNA3.1-JAB1质粒,转染36h后用ELISA方法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性来观察JAB1基因转染对GR转录激活活性的影响.结果随着pCDNA3.1-JAB1质粒剂量的增加,CAT浓度也逐渐上升,表明GR的转录激活活性也逐渐增加.LPS能显著地降低CAT浓度,但共转染pCDNA3.1-JAB1质粒可反转CAT活性的降低.结论 JAB1能增强GR的转录激活活性,LPS能抑制GR的转录激活能力.
关键词： JAB1 糖皮质激素受体α 氯霉素乙酰转移酶报告基因 LPS -
糖皮质激素受体αsiRNA真核表达载体的构建与鉴定
目的 构建糖皮质激素受体α(GRα)小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并检测其抑制结肠癌细胞株Lovo中糖皮质激素受体α表达的效果.方法 根据基因文库中GRα的cDNA序列,设计并合成两段siRNA,分别插入到pGenesil-1质粒中,并对重组质粒(命名为pGenesil-1/GRα1和pGenesil-1/GRα2)进行测序鉴定.脂质体介导下转染Lovo细胞株,RT-PCR和Western Blot检测转染后GRα的表达.结果 成功构建GRαsiRNA 真核表达载体(pGenesil-1/GRα1和pGenesil-1/GRα2);pGenesil-1/GRα2转染(脂质体法)Lovo细胞后,RT-PCR和Western blot检测细胞内GRα的表达显著降低.结论 GRαsiRNA真核表达载体的成功构建为进一步研究GR在结肠癌化疗中的作用奠定了重要的实验基础.
-
激素抵抗肾病综合征患者肾组织GRβ和GRα的表达及意义
目的 探讨肾病综合征激素抵抗患者肾脏组织中GRβ和GRα的表达及意义.方法 据糖皮质激素治疗效果将原发性肾病综合征患者分为以下3组:激素敏感组、激素抵抗组、复发后抵抗组.用免疫组织化学方法检测45例原发性肾病综合征患者肾组织中GRβ和GRα的表达,并用计算机图像分析系统对结果进行分析.结果 复发后激素抵抗组和激素抵抗组肾组织中GRβ含量明显高于激素敏感组(P＜0.05);复发后激素抵抗组肾组织中GRβ与激素抵抗组之间差异无统计学意义(P＞0.05);复发后激素抵抗组和激素抵抗组肾组织中GRα含量明显低于激素敏感组(P＜0.05);复发后激素抵抗组肾组织中GRα与激素抵抗组之间差异无统计学意义(P＞0. 05).结论 肾组织中GRβ的升高和GRα降低可能与原发性肾病综合征激素抵抗有关;检测肾组织中GRβ和GRα表达变化有助于预判断预后和调整治疗.
-
细菌超抗原SEB抑制小鼠角质形成细胞糖皮质激素受体核转移的实验研究
目的 探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对小鼠角质形成细胞糖皮质激素受体GRα核转移的影响.方法 1％二硝基氯苯重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建变应性接触性皮炎动物模型,分别用SEB、地塞米松、SEB+地塞米松处理该模型鼠背部局部皮肤,处理48h后HE染色计数真皮内炎性细胞数量,免疫荧光和Western blot法观察GRα在各组角质形成细胞的胞浆和核浆分布,ELISA法观察IL-2、4、13和TNF-α等炎症因子在各组的表达变化.结果 SEB处理后真皮内炎性细胞显著增加.地塞米松可显著减少炎性细胞数目,而SEB可部分拮抗地塞米松的抗炎作用;激光共聚焦显示正常角质形成细胞GRα主要存在于细胞浆,少量存在于胞核.地塞米松可显著增加GRα核/浆阳性比值,而SEB可显著减弱地塞米松诱导的GRα核/浆阳性比值;Western blot检测也显示地塞米松处理后GRα蛋白入核量显著增多,而SEB可显著抑制地塞米松诱导的GRα蛋白入核量,并增加GRα蛋白胞浆滞留;与正常组相比,皮炎组IL-2、4、13和TNF-α表达均显著升高,地塞米松可显著抑制各炎症因子增多,而SEB可显著拮抗地塞米松对炎性因子的抑制作用.结论 SEB在局部皮炎诱导的激素减敏与其抑制角质形成细胞GRα核转移障碍有关.
-
克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α表达的影响
目的 探讨克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α表达的影响.方法 将40只SPF级BALB/c雌性小鼠按随机数字表法随机分为对照组(Control group),哮喘组(OVA group),哮喘+烟雾暴露组(SEA group),哮喘+烟雾暴露+克拉霉素干预组(CAM group),每组10只.通过卵蛋白致敏激发建立哮喘模型,哮喘小鼠烟雾暴露建立烟雾暴露哮喘小鼠,给予烟雾暴露小鼠克拉霉素干预.小鼠肺组织切片HE染色,组织病理学观察不同组小鼠肺组织病理变化及炎症评分(UNNDERWOOD标准);Elisa法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中白介素(IL-4)及CXCL8炎症介质的表达水平;采用组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)活性检测试剂盒检测不同组小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2活性;Western blot法检测小鼠肺组织组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α蛋白表达.结果 肺组织病理切片示哮喘组及烟雾暴露哮喘组小鼠肺组织炎症显著,克拉霉素干预组小鼠肺组织炎症减轻,病理炎症评分克拉霉素干预组炎症评分(1.833±.0373)低于烟雾暴露哮喘组(4.917±0.187)(P=0.031);克拉霉素干预组小鼠肺组织灌洗液中IL-4(60.78411±11.8858)及CXCL8(313.421±96.5448)低于烟雾暴露哮喘组(P=0.042,P=0.027);与烟雾暴露哮喘组(124.444±16.960)相比,克拉霉素干预组小鼠肺组织中HDAC2(266.889±28.205)活性提高(P=0.035),同时时HDAC2及GRα表达升高(P=0.041,P=0.035).结论 克拉霉素可降低烟雾暴露哮喘小鼠肺组织炎症反应,改善小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α的表达.
-
糖皮质激素局部治疗斑秃的疗效与皮损角质形成细胞α受体表达的关系
目的 探讨糖皮质激素(GC)局部治疗斑秃的疗效与皮损角质形成细胞的糖皮质激素α受体(GR-α)表达的相关性.方法 门诊确诊的斑秃患者治疗前取皮损,用ELISA法检测分离提取角质形成细胞蛋白质中的GR-α.均予卤米松乳膏外搽治疗3个月,对42例完成试验的斑秃患者按疗效分为痊愈、显效、进步及无效,痊愈加显效组为有效组,进步加无效为抵抗组.比较各组GR-α表达的差异.结果 卤米松治疗斑秃的有效率为64.29%,角质形成细胞GR-α的表达显效、进步及无效组分别与痊愈组比较,差异均无显著性意义(P均＞0.05),但有效组明显高于抵抗组,差异有统计学意义(P＜0.05).Spearman相关分析发现GR-α的表达与疗效无明显相关性.结论 卤米松乳膏治疗斑秃时,有效组皮损GR-α的表达高于抵抗组,但GR-α的表达与疗效无明显的量效相关性.
-
激素依赖性皮炎的发病机制认识
“激素依赖性皮炎”是皮肤科的新疑难题,因多发生于面部,故常称面部糖皮质激素依赖性皮炎.其具体发生机制不清;可能的机制为患者表皮内GR-α(糖皮质激素受体α)与糖皮质激素的亲和力下降、类固醇使血管收缩而导致局部代谢产物如一氧化氮(NO)等堆积、长期大量的外用强效或超强效糖皮质激素制剂导致糖皮质激素对下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)抑制、糖皮质激素外用使皮肤屏障功能受损并活化各种炎性细胞因子以及微生物感染等.
