季节因素对大鼠下后丘脑和垂体褪黑素受体的影响

目的探索季节变化对大鼠性腺轴褪黑素(MT)受体的影响及其生理机理. 方法采用大鼠松果体摘除模型,运用放射性配基饱和法,测定雄性SD大鼠性腺轴褪黑素受体的大结合量(Bmax)和解离常数(Kd值)的冬夏变化. 结果在正常生理条件下,下丘脑和垂体褪黑素受体Bmax值(P<0.05)、Kd值(P<0.01)均表现为冬高夏低.摘除松果体后,除了垂体夏季手术组Bmax值与正常对照组相比没有明显变化(P>0.05),冬、夏季节下丘脑、垂体手术组Bmax值和Kd值都明显高于相应的正常对照组(P<0.01).而睾丸的褪黑素受体因含量极少而无法测出其与125I-MT特异性结合的Bmax值和Kd值. 结论下丘脑、垂体褪黑素受体具有明显的季节性节律变化,松果体可能在此过程中起重要的调节作用.

人体胃组织褪黑素受体鉴定及生物学特性

为明确人体胃组织是否存在褪黑素受体(MR),应用放射配体结合法检测人体胃组织MR特异结合量.结果发现125I标记褪黑素(125I-Mel)大结合容量(Bmax)0.48±0.11fmol/mg蛋白;平衡解离常数(Kd)为51±17pmol/L.动力学分析表明该特异结合为可逆性结合.特异性分析表明对Mel及其激动剂具高度特异性.亚细胞分布,以线粒体及细胞核含量高.GTPrS试验:MR的Bmax及Kd值均有改变.结论:人体胃组织存在MR,其信号转导通路可能为G蛋白介导的通路.

褪黑素受体信号通路在2型糖尿病中的作用

褪黑素是松果体分泌的激素,能调节包括睡眠在内的诸多生理过程.褪黑素通过与其受体特异性结合而在中枢和外周都发挥功能.胰腺β细胞中,褪黑素受体介导的信号通路可影响胰岛素的分泌以及β细胞的功能,并可通过提高5-羟色胺-N-乙酰基转移酶的活性来促进褪黑素的生成,而上调的褪黑素可抑制胰岛素的分泌,升高血糖.

褪黑素受体亚型Mel 1a和Mel 1b在大鼠中枢神经系统的分布差异--原位杂交研究

目的研究Meel 1a、Mel 1b褪黑素膜受体在大鼠中枢神经系统的表达及分布差异.方法原位杂交组织化学.结果(1)Mel 1a mRNA阳性细胞主要分布于海马、大脑皮层、视上核、室旁核、视交叉上核、橄榄核、小脑皮层、小脑顶核、脊髓前角、面神经核、巨细胞网状核、纹状皮质、三叉神经核等.(2)Mel 1b mRNA阳性细胞主要分布于小脑皮层和顶核、球状核、栓状核、海马、大脑皮层、脊髓前角、视上核和交叉上核.结论Mel 1amRNA在中枢分布广泛、含量丰富,而Mel 1b mRNA在中枢分布较局限.在海马和大脑皮层,这两种受体均有丰富表达.

黄芪总苷对应激大鼠胃黏膜氧自由基及褪黑素受体的影响

目的:探讨黄芪总苷对应激大鼠胃黏膜褪黑素受体基因表达及氧自由基变化的影响.方法:SD大鼠48只分为4组,即正常对照组,模型组,黄芪总苷组和雷尼替丁组,每组12只.采用水浸-束缚应激模型,观察胃黏膜损伤指数,比色法检测胃黏膜SOD活性、MDA含量,RT-PCR法测定褪黑素受体1、2亚型mRNA表达变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜损伤指数明显增高,MDA含量增高,SOD活性下降,褪黑素受体1、2基因表达降低,黄芪总苷预防给药后可明显降低应激大鼠胃黏膜损伤指数(6.75±4.10 vs 16.83±4.96,P＜0.01)和MDA含量(0.45±0.07 vs 0.79±0.36,P＜0.05),升高SOD活性(110.62±26.42 vs 71.74±22.20,P＜0.05)和褪黑素受体1、2基因表达(0.86±0.12 vs 0.54±0.05,0.79±0.14 vs 0.50±0.10,均P＜0.01).结论:黄芪总苷对水浸.束缚应激大鼠胃黏膜损伤有保护作用,其保护机制可能与调节胃黏膜褪黑素受体,并参与抗氧自由基损伤有关.

药物处理对失眠症斑马鱼睡眠的影响以及相关作用机制

目的 观察药物处理对失眠症斑马鱼睡眠的改善作用,并探讨银杏叶滴丸(GBP)对γ-氨基丁酸A型受体α1亚单位(GABRA1)和褪黑素受体1类亚型(MTNR1)mRNA表达的影响.方法 采用咖啡因诱导活体斑马鱼建立失眠模型,分别水溶给予GBP(低剂量组56μg/mL、中剂量组167μg/mL、高剂量组500μg/mL)、金纳多(Ginaton,低剂量组56μg/mL、中剂量组167μg/mL、高剂量组500μg/mL)和氯化锂(阳性对照组,500μM),同时设置正常对照组和失眠组,应用行为分析仪定量斑马鱼处于失眠状态的时间,评价GBP对斑马鱼睡眠的改善作用.另取失眠模型斑马鱼,水溶给予GBP 56、167、500μg/mL,同时设置正常对照组和失眠组,采用RT-PCR检测GABRA1和MTNR1 mRNA的相对表达量.结果 在观察的1 h(3600 s)内,失眠组斑马鱼失眠时间多于正常对照组,(1598±277)svs.(1240±129)s,差异有统计学意义(P<0.01).阳性对照组斑马鱼失眠时间为(1368±170)s,少于失眠组,差异有统计学意义(P<0.05).低剂量、中剂量、高剂量的GBP对睡眠的改善作用分别为72%、95%和97%.低剂量、中剂量、高剂量的Ginaton对睡眠的改善作用分别为78%、80%和95%.与正常对照组比较,GBP低剂量组GABRA1 mRNA相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.01);失眠组、GBP中剂量组和高剂量组无明显变化,差异无统计学意义(P均>0.05);与失眠组比较,GBP低剂量组GABRA1 mRNA相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.01).MTNR1 mRNA相对表达量:与正常对照组比较,失眠组、GBP低剂量组和高剂量组降低,差异有统计学意义(P均<0.01),GBP中剂量组无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);与失眠组比较,GBP低剂量组、中剂量组和高剂量组均升高,差异有统计学意义(P均<0.01).结论 低、中、高浓度银杏叶滴丸和金纳多对失眠症斑马鱼睡眠均有显著改善作用;银杏叶滴丸改善睡眠的可能机制为抑制GABRA1的表达和改善MTNR1的表达.

青少年特发性脊柱侧凸患者软骨细胞中褪黑素受体的表达量

目的:观察青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患者软骨细胞中褪黑素受体含量的变化,并探讨其与AIS病因学的关系.方法:随机选取2007年1月～2007年12月在我院手术治疗的22例AIS患者及8例非脊柱侧凸(肿瘤、外伤等)患者(对照组).AIS组患者年龄10～16岁,平均12.7岁,平均Cobb角60.1°,其中10例在术中取髂软骨,12例取棘突软骨.对照组患者年龄10～15岁,平均12.9岁,其中7例在术中取髂软骨,1例取棘突软骨.对髂软骨和棘突软骨标本进行细胞培养至二代,取二代细胞用Ⅱ型胶原免疫组化染色方法进行软骨细胞表型鉴定,并抽提总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测软骨细胞中褪黑素受体两种亚型MTNR1A、MTNR1B的mRNA表达量.结果:两组患者软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色均为阳性表达.AIS组软骨细胞中MTNR1A、MTNR1B mRNA的相对表达量分别为0.44±0.29和0.54±0.31,对照组分别为0.69±0.18和0.83±0.30,组间比较均有显著性差异(P<0.05).结论:AIS患者软骨细胞中MTNR1A、MTNR1B的mRNA表达均减少,这可能与AIS的发生、发展有关.

褪黑素受体在不同程度退变腰椎髓核组织中的表达

目的:研究褪黑素受体褪黑素1型受体(MT1)、褪黑素2型受体(MT2)以及核转录因子-κB(NF-κB)在不同程度退变腰椎髓核组织中的表达.方法:选取2014年3月～2016年1月于我院住院患者31例(19例男性和12例女性,年龄47～62岁,平均56.9±4.9岁).采用MRI对髓核退变程度进行Pfirrmann分级并经手术收集髓核标本,其中Ⅳ级标本11例纳入退变Ⅰ组;V级标本12例纳入退变Ⅱ组;8例分级小于Ⅲ级标本纳入对照组.实时定量PCR检测髓核组织中MT1、MT2、NF-κB mRNA的表达,免疫印迹和免疫组织化学技术检测MT1、MT2、p65 NF-κB和磷酸化p65 (p-p65)NF-κB蛋白的表达,利用Spearman相关分析退变髓核组织中MT1、MT2、NF-κB蛋白表达的关系.结果:实时定量PCR结果显示对照组MT1和MT2 mRNA分别为1.00±0.04和1.00±0.04,退变Ⅰ组MT1和MT2 mRNA分别为0.68±0.06和0.77±0.04,退变Ⅱ组MT1和MT2 mRNA分别为0.52±0.03和0.68±0.06,各组间均存在统计学差异(P＜0.05).各组NF-κB mRNA分别为1.00±0.03、0.99±0.07、0.98±0.05,无统计学差异(P＞0.05).免疫印迹结果显示对照组MT1和MT2蛋白表达分别为1.00±0.05和1.00±0.05,退变Ⅰ组为0.73±0.07和0.56±0.04,退变Ⅱ组别为0.62±0.05和0.55±0.04,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).三组p65 NF-κB表达水平分别为1.00±0.05、1.00±0.06、0.99±0.04,无统计学差异(P=0.920).对照组p-p65 NF-κB蛋白为1.00±0.07,退变Ⅰ组和退变Ⅱ组p-p65 NF-κB蛋白水平分别为1.43±0.08和1.49±0.08,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学技术检测结果显示退变髓核组织MT1和MT2蛋白与p-p65蛋白表达具有负相关关系(P＜0.05),相关系数r分别为-0.6492和-0.6190.结论:髓核组织退变程度增加,褪黑素受体表达降低,而NF-κB活化增加,进而参与椎间盘组织退变过程.

褪黑素受体对大鼠心肌缺血再灌注损伤的调控及其机制研究

目的：研究褪黑素膜受体（ MR）在褪黑素（ Mel）抗心肌缺血再灌注（ MI／R）损伤机制中的作用。方法雄性SD大鼠80只随机分为四组：假手术组（ Sham）、MI／R＋溶剂对照组（ MI／R＋V）、MI／R＋Mel治疗组（ MI／R＋Mel）、MI／R＋Mel＋Luz组（ MI／R＋Mel＋Luz），Luz（ Luzindole）为MR特异性阻断剂。大鼠冠状动脉左前降支结扎和松开方法建立大鼠MI／R模型，心肌缺血30 min，再灌6 h后ELISA法检测心肌组织氧化应激相关指标，TUNEL法检测心肌细胞凋亡率，Evans blue－TTC双染法测定梗死面积，Western blot法检测沉默信息转录调控因子1（ SIRT1）、乙酰化叉头转录因子1（ Ac－Foxo1）、Caspase－3及褪黑素受体（ MR）的表达水平，再灌注72 h后超声心动图法检测各组大鼠心功能。结果与缺血再灌注组相比，Mel治疗显著改善心脏左室射血分数[LVEF，（65．18±5．863）％vs （47．37±4．201）％， P＜0．01]及左室短轴缩短率[LVFS，（36．19±3．299）％vs （22．80±0．8881）％， P＜0．01]，下调心肌组织超氧化物[（2．881±0．1908）RLU／（mg·s） vs （3．955±0．3022） RLU／（mg·s）， P＜0．01]、丙二醛（MDA）生成[（269．1±11．24）pmol／mg vs （412．7±24．39）pmol／mg， P＜0．01]及gp91phox的表达[（3．404±0．2440） vs （4．388±0．1463）， P＜0．01]，上调超氧化物歧化酶（SOD）[（35．83±2．959）U／mg vs （21．11±2．004）U／mg， P＜0．01]、SIRT1[（0．8033±0．05357） vs （0．3313±0．04337）]， P＜0．01]，下调Ac－Foxo1水平[（0．2393±0．01440） vs （0．3536±0．01384）， P＜0．01]；而Luz阻断MR后逆转Mel的上述作用（均P＜0．01）。结论 Mel通过MR激活SIRT1信号通路，显著减轻大鼠MI／R氧化应激损伤，发挥抗氧化应激抗凋亡心肌保护作用。

褪黑素受体1B基因rs10830962位点单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病发病的关系

妊娠期糖尿病（GDM）是1种妊娠后首次发现或发病的糖尿病，不仅增加围产期孕妇和胎儿的风险，也增加这些孕妇远期发生2型糖尿病（T2DM）、代谢综合征及其子代肥胖的概率。目前，GDM的病因及发病机制尚未完全明确，但其与T2DM具有相似的临床特征，均存在胰岛素分泌缺陷或胰岛素抵抗，提示两者可能存在相同的遗传基础[1-2]。近年来的研究证实，褪黑素受体（MTNR）1B基因是T2DM的候选基因[3]，MTNR1B基因rs10830962位点单核苷酸多态性（SNP）与葡萄糖代谢和胰岛β细胞的功能密切相关，与T2DM的发病具有高度的相关性[4]。该基因位于染色体11q21~q22，编码高亲和力G蛋白偶联受体，与松果体分泌的激素--褪黑素（melatonin）结合而发挥生理作用。2012年，Kwak等[5]通过对韩国GDM人群的研究发现，MTNR1B基因rs10830962位点SNP与GDM的发病具有显著相关性。2013年，Li等[6]通过对中国汉族的GDM患者及正常孕妇的MTNR1B基因rs10830962位点进行研究，结果发现， rs10830962位点SNP与GDM发病无明显相关性。上述两项研究的结果不同，提示，GDM的发病在不同的人群中可能存在一定的遗传异质性。本研究采用Sanger测序技术及小测序法（SNaPshot）分型技术，探讨MTNR1B基因rs10830962位点SNP与GDM发病的关系。现将结果报道如下。

中医"肾应冬"调控机制与褪黑素受体关系的研究

目的 通过观察性腺轴褪黑素受体的季节性变化,从而深入揭示"肾应冬"的调控机制.方法 采用放射性配基饱和法,检测雄性SD大鼠性腺轴褪黑素受体的大结合量(Bmax)和解离常数(Kd值)的冬夏变化.结果 在正常生理条件下,下丘脑(P＜0.05)和垂体(P＜0.05)Bmax值均表现为冬高夏低.下丘脑(P＜0.05)和垂体(P＜0.01)Kd值均表现为冬高夏低.摘除松果腺后,冬季手术组下丘脑(P＜0.01)、垂体(P＜0.01)Bmax值都明显高于正常组,夏季手术组下丘脑(P＜0.01)Bmax值明显高于正常组.冬、夏手术组下丘脑(P＜0.01)、垂体(P＜0.01)Kd值都明显高于相应的正常组.而睾丸的褪黑素受体的Bmax值和Kd值因含量极少而无法测出.结论 "肾应冬"调控机制与性腺轴褪黑素受体的季节性变化有关,松果腺在此过程中起了重要的高位调节作用.

褪黑素受体1A基因rs13140012位点T基因多态性增加特发性草酸钙结石易感性风险

目的 研究褪黑素受体1A基因rs13140012位点A/T多态性与特发性草酸钙结石的关系.方法 根据纳入和排除标准,在江西省汉族人群内,进行相关试验研究.采用RT-PCR技术监测研究对象外周血中MTNR1A的基因多态性.结果 共纳入260例研究对象,其中特发性草酸钙结石(ICOS)患者115例和对照组145例.试验组与对照组两组基线可比:性别、年龄和体重指数差异无统计学意义.SNP rs13140012位点A等位基因频率在ICOS组和健康对照组分别为:86%VS 95.2%.T等位基因频率分别为14%VS 4.8%.ICOS和健康人群相比,SNP-A与SNP-T的基因频率有显著的差异(P<0.001).结论 MTNR1A基因rs13140012位点A/T与ICOS易感性存在相关性,T是特发性草酸钙结石的危险因素.

松果腺褪黑素及其受体对卵巢作用及中医药干预的研究进展

松果体在人脑百会穴下,双眉之间,印堂之后深处,位于第三脑室.其分泌的主要效应物质褪黑素具有调节生物钟、生殖和抗氧化等作用.尽管褪黑素对下丘脑-垂体-卵巢轴整体呈现抑制作用,但其对卵巢局部仍具有一定的保护作用,这种保护作用是通过清除自由基抗氧化损伤,抑制细胞凋亡实现的.现就褪黑素及其受体的理化性质、生物学功能以及褪黑素及其受体对卵巢的作用予以综述.

松果腺褪黑素及其受体对下丘脑-垂体-性腺轴作用的研究进展

褪黑素是松果体分泌的一种神经内分泌激素,在生物钟、生殖、免疫、抗氧化等方面有重要作用.褪黑素及其受体通过其主要的理化性质和生物学功能,对下丘脑-垂体-性腺轴发挥全线抑制作用.在不同年龄段抑制程度可能有所差别,其可能机制是下丘脑-垂体-性腺轴功能随年龄改变,对褪黑素的反应亦发生变化.研究褪黑素及其受体对下丘脑-垂体-性腺轴的作用,有利于发挥其在生物、医学、社会不同领域的优势.

褪黑素激活大鼠大脑中动脉BKCa通道的受体依赖和 非受体依赖途径

目的:研究褪黑素通过大电导Ca2+激活K+(BKCa)通道介导大脑中动脉张力变化的作用机制.方法:8周龄雄性Wistar大鼠,麻醉后取大脑中动脉,酶消化法急性分离脑中动脉平滑肌细胞,采用膜片钳技术全细胞记录模式检测细胞外液加入褪黑素前后BKCa通道和电压门控钾(KV)通道的电流密度,褪黑素受体抑制剂2-苯基-N-乙酰色胺(luzindole)孵育后,全细胞记录模式记录加入褪黑素后BKCa通道电流幅值和贴附式单通道记录模式记录加入褪黑素后BKCa通道Po值,内面向外记录模式检测加入褪黑素后BKCa通道电导(G),开放概率(Po),平均开放时间(To)和关闭时间(Tc).结果:①褪黑素(100μmol/L)显著增加全细胞BKCa通道电流密度,但对KV通道电流密度无显著影响;②luzindole(1μmol/L)显著抑制褪黑素引起的BKCa通道电流密度增加;③贴附式单通道记录模式下,褪黑素(100μmol/L)增加BKCa单通道Po值,luzindole(1μmol/L)显著抑制褪黑素引起的Po增加;④内面向外单通道记录模式下,褪黑素(1μmol/L,100μmol/L)缩短BKCa单通道的To和Tc值,且Tc较To显著缩短;结论:褪黑素通过受体依赖和非受体依赖途径激活BKCa通道,介导大脑中动脉血管舒张.

褪黑素受体在Graves病患者外周血白细胞上的表达

Graves病(GD)是一种自身免疫性疾病,目前大量的研究表明褪黑素能抑制下丘脑-垂体-甲状腺轴,调节免疫功能,动物实验显示褪黑素与甲状腺疾病有关,而褪黑素受体(MR)与甲状腺疾病的关系尚未见报道,本试验旨在探讨Graves病患者褪黑素受体有无改变及其意义.

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中褪黑素受体和多效蛋白的表达

目的 体外诱导成人骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化,并探讨分化过程中多效蛋白(PTN)和褪黑素(Mel)受体亚型MT1、MT2 mRNA的表达,以探索MSCs向神经元样细胞分化的特性和机制.方法 密度梯度离心加贴壁培养法分离成人MSCs,原代和传代培养.取第6代MSCs设对照和实验组进行诱导,诱导后30 min至3 d,观察细胞形态并计数.免疫细胞化学法和RT-PCR法测定分化后细胞神经细胞特异性表面标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和诱导前、诱导后12h PTN和MT1、MT2 mRNA的表达.结果 接种24 h后MSCs开始贴壁,呈圆形或椭圆形.3 d后可见梭状细胞呈集落状生长,10 d～14 d融合.第5代～第6代时呈现较均一的成纤维细胞样形态.诱导后胞体向胞核收缩;出现双极及多极细胞.12 h变形细胞增多,细长突起相互连接.24 h后变形细胞增多不明显.诱导后12 h大部分细胞表达NSE、MAP-2,未检测到GFAP的表达.实验组诱导后12 h细胞有PTN和MT1mRNA的表达.结论 PTN和Mel信号传导可能参与调控了MSCs向神经元样细胞的分化.

褪黑素通过视黄酸相关孤儿受体α可抑制骨髓间充质干细胞的成脂肪分化

背景：前期研究发现，褪黑素能够抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化，但其作用机制有待进一步研究。
　　目的：探索褪黑素是否通过核受体视黄酸相关孤儿受体α介导抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化的作用机制。
　　方法：无菌采集骨髓样本，采用密度梯度离心结合贴壁培养分离培养人骨髓间充质干细胞，用流式细胞仪鉴定细胞表面表型。然后将细胞分为褪黑素组、CGP52608组和对照组，分别以含褪黑素、CGP52608脂肪维持液和正常的脂肪诱导液进行诱导，用荧光定量PCR和Western blot法检测核受体视黄酸相关孤儿受体α在骨髓间充质干细胞以及其成脂肪分化过程中的表达特征。用受体特异性激活剂 CGP52608，考察核受体视黄酸相关孤儿受体α激活状态下，骨髓间充质干细胞成脂肪分化的影响。
　　结果与结论：原代分离的骨髓间充质干细胞生长旺盛，呈纤维梭状，流式鉴定间充质干细胞表型结果示，CD34和CD45表达阴性，CD29，CD44与CD105表达阳性。荧光定量PCR发现骨髓间充质干细胞高表达褪黑素核受体视黄酸相关孤儿受体α，而且褪黑素能够呈浓度依赖性促进骨髓间充质干细胞表达视黄酸相关孤儿受体α；Western blot检测结果也证实褪黑素呈浓度依赖性促进视黄酸相关孤儿受体α在蛋白水平的表达。在成脂肪分化过程中，褪黑素在早期明显上调视黄酸相关孤儿受体α表达，但在中后期就维持在相对低水平。后，用CGP52608激活视黄酸相关孤儿受体α后，骨髓间充质干细胞成脂肪分化被抑制。因此，褪黑素通过核受体视黄酸相关孤儿受体α抑制骨髓间充质干细胞成脂肪分化，褪黑素在调节脂肪细胞分化过程中发挥重要作用。

褪黑素受体MT1在骨肉瘤中的表达及临床意义

采用免疫组化法检测MT1在40例骨肉瘤及20例骨软骨瘤组织中的表达.结果显示MT1在骨肉瘤中的表达率(70%)明显高于骨软骨瘤(35%)(P<0.05).MT1的表达与骨肉瘤的Enneking分期、复发和转移相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤体积、Dahlin's组织学分型无关(P>0.05).因此,MT1可作为骨肉瘤术后风险判断指标之一;同时为褪黑素提供了结合靶点,为研究外源性褪黑素在治疗骨肉瘤中的应用提供了依据.

人皮肤组织褪黑素受体的鉴定及生物学意义