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地黄多糖干预对多次低剂量X线照射小鼠血清性激素水平的影响
目的 探讨地黄多糖(RPS)干预对多次X线照射后小鼠血清性激素水平的影响. 方法 选择雄性昆明小鼠70只[5～6周龄,体重(22±2)g)],随机分为A组(单纯照射组,21只)、B组(照射+200 mg/kg RPS灌胃组,21只)、C组(照射+800 mg/kg RPS灌胃组,21只)、D组(对照组7只);再将A、B、C组分别随机分为3组,每组7只.所有小鼠在照射前5d开始每天灌胃1次,其中A组及D组给予0.2 mL生理盐水灌胃,B组及C组分别给予200 mg/kg、800 mg/kgRPS溶于0.2mL生理盐水灌胃,共灌胃20次;A、B、C组采用低剂量X线每天1次全身照射,共15次;单次照射剂量分别为0.025 Gy、0.075 Gy、0.100 Gy,剂量率为0.025 Gy/min.所有小鼠在末次照射结束后48 h内在麻醉通过下腔静脉采血,脱颈法处死小鼠、摘取睾丸并称重;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平. 结果 随着X线照射剂量的增加,小鼠睾丸重量及睾体比值逐渐降低(P＜0.05);给予不同剂量RPS灌胃可以增加0.1Gy照射后小鼠的睾体比值,差异有统计学意义(P＜0.05);血清FSH在0.1Gy单纯照射组(A组)较对照组(D组)明显增高[(22.54±7.19) U/Lvs.(31.61±6.07) U/L](P＜0.05),而LH、T的变化在A组和D组中差异均无统计学意义(P＞0.05);给予不同剂量(200 mg/kg及800 mg/kg)RPS灌胃干预后,不同低剂量X线照对小鼠血清性激素水平均未产生明显影响. 结论 多次低剂量X线全身照射在大剂量时可引起小鼠血清FSH水平和睾体比值改变,RPS干预对多次低剂量X线全身照射小鼠引起的生殖内分泌功能损伤有一定保护作用.
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地黄多糖对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的：观察地黄多糖对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将大鼠按随机数字表法分为假手术组，模型组，地黄多糖低、中、高剂量组，复方丹参片组，每组20只。除假手术组外，其余各组大鼠采用夹闭冠状动脉30 min后松夹恢复血流的方法制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型。造模后，地黄多糖低、中、高剂量组大鼠分别灌胃地黄多糖溶液10、20、40 mg/kg，复方丹参片组灌胃复方丹参片混悬液260 mg/kg，假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续给药4周。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色观察各组大鼠心肌梗死面积；采用原位细胞凋亡检测法观察心肌细胞凋亡状况并计算凋亡指数；通过免疫组织化学法检测心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, bcl-2)、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白的表达并进行半定量分析。结果与模型组比较，地黄多糖中、高剂量组大鼠心肌组织梗死面积[(31.7±6.1)%、(22.8±5.5)%比(43.9±6.7)%]、心肌细胞凋亡指数[(44.6±6.7)%、(32.8±5.4)%比(59.4±9.0)%]降低(P＜0.05或 P＜0.01)；心肌组织中 bcl-2蛋白[(0.40±0.09)、(0.45±0.08)比(0.26±0.05)]表达升高(P＜0.05或P＜0.01)；Bax蛋白[(0.55±0.11)、(0.28±0.08)比(0.85±0.13)]、caspase-3蛋白[(0.11±0.03)、(0.08±0.02)比(0.16±0.03)]表达降低(P＜0.05或P＜0.01)，bcl-2/Bax比值[(0.73±0.05)、(1.61±0.20)比(0.31±0.08)]升高(P＜0.05或P＜0.01)。结论地黄多糖对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用，可提高 bcl-2/Bax 比值、下调caspase-3表达。
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地黄多糖对大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞诱导分化作用的研究
目的:探讨地黄多糖体外对大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs)分化为神经样细胞的诱导作用.方法:以大鼠BMSCs为研究对象,采用流式细胞仪检测BMSCs表面标志,MTT法检测细胞生长曲线,当第3代细胞爬片达到80％以上汇合时,分为对照组、化学方法诱导组(5 mmol·L -1,β-mercap toethanol)、脑源性神经生长因子(10 μg·L-1,BDNF)组和地黄多糖组(200 mg·L-1)进行诱导,6h后应用免疫细胞化学染色法检测各实验组神经元巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,RT-PCR检测nestin,NSE,βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)和GFAP mRNA的表达情况.结果:经分离鉴定培养5代以内大鼠BMSCs增殖旺盛、具有较好的细胞活力；免疫细胞化学染色和RT-PCR检测结果显示,对照组不表达神经细胞标志物,各诱导组诱导后有特异性神经细胞标志物表达.其中地黄多糖组Nestin,NSE阳性细胞率分别为( 56.74±1.36)％,(73.37±1.27)％,高于化学诱导组(28.21±2.43)％,(2.31±2.72)％和神经生长因子组(31.3±1.61)％,(28.87±1.65)％,(P＜0.05)；GFAP阳性细胞率(20.17±1.27)％低于化学诱导组和神经生长因子组,差异具有统计学意义(P＜0.05)；化学诱导组Nestin,NSE和GFAP阳性细胞率与生长因子组比较,差异无统计学意义.结论:地黄多糖具有诱导BMSCs向神经样细胞分化的作用,主要向神经元样细胞方向诱导.
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地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响
目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg· L-1干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L-1)干预组,每组设10个复孔.各组细胞经药物干预6h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析.结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P＜0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P＜0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P＜0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P＜0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg-L-1干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P ＜0.05,P＜0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关.
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地黄多糖的化学和药理作用研究进展
临床上应用的含地黄方剂种类众多,地黄多糖是其发挥作用的有效成分之一.本文全面总结近20年地黄多糖的化学结构、药理作用的研究进展,为地黄多糖和含地黄方剂的进一步研究与开发提供参考.检索中国知网,万方,PubMed,SpringerLink,ScienceDirect等国内外数据库,收集地黄多糖在化学成分、药理作用方面的文献,对其进行归纳和总结,形成综述.目前为止,从地黄中已经分离鉴定得到了相对分子质量为103 ～ 105的7种地黄多糖,由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖等多种单糖组成.药理研究表明,地黄多糖对正常动物和病理动物都有较好的抗氧化能力,并进一步发挥抗衰老、抗肿瘤的活性;可通过多种途径降低病理模型动物的血糖和血脂水平;通过影响免疫器官、免疫细胞和细胞因子等增强正常动物和病理动物的免疫功能;促进正常动物和病理动物的骨髓造血作用;直接或间接发挥预防癌变和抗肿瘤的作用;保护脂肪间充质干细胞并促进其增殖;通过多种途径诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化,且主要的方向为神经元样细胞,并与正常神经元高度相似;还有抗疲劳、抗焦虑的作用.今后,仍需要分析地黄多糖的化学结构,对地黄多糖进行深入的毒理和临床药理研究,明确其作用机制,为地黄多糖在临床的扩大应用和安全使用奠定基础.
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地黄多糖诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响
目的 探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的作用及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响.方法 取大鼠P3-P5代BMSCs,随机分为正常对照组(CON组)、神经生长因子组(BDNF组,10μg/ml)和地黄多糖诱导A、B、C组(RGP组,浓度分别为50、100、200μg/ml),诱导后连续培养7d.观察细胞一般形态.采用Western blotting检测CON组与RGP C组神经标志物相关蛋白神经巢蛋白(Nestin)、βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,免疫荧光法和Western blotting分别检测各组诱导后0、1、3、7d时Notch1、Jagged1蛋白和Notch1胞内段NICD的表达.结果 CON组始终以梭形细胞为主,RGP C组第5天起出现神经元样细胞.Western blotting检测到RGP C组Nestin蛋白表达由强到弱,NSE和βⅢ-tubulin蛋白表达由弱到强,GFAP蛋白呈弱表达.免疫荧光结果显示,RGP各组各时间点Notch1蛋白阳性细胞率均显著低于CON组(P＜0.05),且随时间延长Notch1蛋白表达阳性率逐渐降低;RGPC组中Jagged1阳性细胞率诱导后1d时具有明显的上升趋势,而后显著下降(P＜0.05),BDNF组基本无Jagged1蛋白表达.Western blotting检测结果与免疫荧光检测结果类似.结论 地黄多糖具有诱导BMSCs向神经元样细胞分化的作用,且可影响Notch1和Jagged1蛋白的表达.
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地黄多糖对小鼠免疫功能的影响
目的:研究地黄多糖(RGPS)对正常小鼠免疫功能的影响.方法:以200、400、800mg(kg·d)剂量灌胃给药10 d,观察RGPS对小鼠胸腺指数、脾指数、吞噬指数、外周血CD4+和CD8+细胞的影响,采用体外给药的方法观察其对脾脏T淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬活性的影响.结果:在一定的剂量范围内,RGPS可显著提高小鼠的脾指数,增强单核巨噬细胞的吞噬功能,提高CD8+细胞的比例,但对CD4+细胞无明显影响.体外实验表明,一定浓度的RGPS可明显促进T淋巴细胞增殖,增强腹腔巨噬细胞的吞噬活性.结论:地黄多糖可增强小鼠的非特异性免疫功能和细胞免疫功能.
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地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的研究
目的 研究地黄多糖(RPS)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 取出生3天的SD大鼠乳鼠分离心肌细胞,培养72h后分为6组:空白对照组、缺氧/复氧模型对照组、地黄多糖(10、20、40μg/ml)干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/ml)干预组,每组设10个复孔.各组细胞经药物干预6h后,通过倒置光学显微镜观察各组细胞形态变化,通过甲基四唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率,通过流式细胞术测定细胞凋亡率;测定各组细胞培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]含量;测定各组细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)含量.结果 与缺氧/复氧模型对照组相比,地黄多糖干预组心肌细胞形态明显好转,细胞存活率明显升高、凋亡率显著降低,培养液中AST、CPK、LDH含量显著降低,细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,其中以地黄多糖40 μg/ml干预组效果为显著,差异具有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论 地黄多糖能够有效改善缺氧/复氧损伤心肌细胞形态、提高细胞存活率、降低细胞凋亡率、改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,提示地黄多糖对缺氧/复氧损伤心肌细胞具有保护作用.
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地黄多糖对糖尿病肾病大鼠模型的治疗作用及对RAGE/NF-κB信号通路的影响
[目的]探讨地黄多糖（RG）对糖尿病肾病（DN）大鼠模型的治疗作用以及对 RAGE/NF-κB 信号通路的影响。[方法]采用随机数字表法将健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠分为5组（n=10），腹腔注射链脲佐菌素（STZ）构建DN大鼠模型，给予低、中、高3种不同剂量的RG，通过检查体质量变化、空腹血糖、胰岛素水平、血清肌酐、血清尿素氮、24 h尿量及尿蛋白等指标，观察RG对DN大鼠模型的治疗作用；同时采用Western Blot测定各组动物肾脏组织晚期糖基化终末产物特异性受体（RAGE）、细胞核因子-κB（NF-κB）的表达水平。[结果] RG可以显著改善DN大鼠的相关生化指标，增加大鼠肾脏组织中RAGE和NF-κB表达，发挥抗炎作用。[结论]地黄多糖对糖尿病肾病大鼠模型具有保护作用，其机制可能与RAGE/NF-κB信号通路有关。
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复合酶法优化地黄多糖的提取工艺研究
目的:探讨复合酶法优化提取地黄多糖工艺的方法.方法:通过单因素和L9 (34)正交实验设计,以地黄多糖含量为考察指标,以酶解温度、酶浓度、酶解时间及酶解pH对多糖得率的影响为试验因素,优选地黄多糖的提取工艺.结果:佳酶解提取工艺条件为:酶解温度55℃,酶浓度4.5％,酶解时间2.0h,酶解pH 6.0.在此提取工艺条件下,地黄多糖含量占原药材的7.58％.结论:复合酶法提取地黄多糖工艺操作简便、快捷,重复性、稳定性良好.
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地黄多糖对心肌缺血再灌注损伤大鼠保护作用研究
目的:研究地黄多糖(RPS)对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用.方法:取120只实验用SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、地黄多糖治疗组(10、20、40 mg/kg)和复方丹参片治疗组(260 mg/kg);通过夹闭冠状动脉30 min后恢复血流再灌注的方法制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,术后立即给药治疗.4周后,通过TTC染色测定各组大鼠心肌梗死面积,通过苏木精-尹红(HE)染色观察心肌组织病理性形态学改变,原位细胞凋亡检测(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡状况并计算凋亡指数;测定血清中总抗氧化能力(T-AOC)水平和谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量.结果:与模型对照相比,地黄多糖(20、40 mg/kg)治疗组大鼠心肌梗死面积显著降低(P＜0.05,P＜0.01);地黄多糖各治疗组大鼠心肌组织病变和心肌细胞凋亡状况均好转,其中以40mg/kg治疗组效果为显著;地黄多糖(20、40 mg/kg)治疗组心肌细胞凋亡指数显著降低(P＜0.05,P＜0.01);地黄多糖(10、20、40 mg/kg)治疗组大鼠血清中AST、CPK含量显著降低,心肌组织中MDA含量显著降低;其中20、40mg/kg治疗组大鼠血清中LDH含量显著降低,T-AOC水平和心肌组织中SOD、CAT活性均显著升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:地黄多糖能够降低心肌组织梗死面积,改善组织病理学改变,抑制心肌细胞凋亡,改善心功能,提示地黄多糖对心肌缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,其作用机制可能与地黄多糖能够改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤有关.
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地黄多糖和寡糖的药理作用研究进展
生地黄药性甘寒,归心、肝、肾经,具有清热凉血、养阴生津之功效,用于热入营血、温毒发斑、吐血衄血、热病伤阴、舌绛烦渴、津伤便秘、阴虚发热、骨蒸劳热、内热消渴等的治疗;熟地黄药性甘温,归肝、肾经,具有补血滋阴、益精填髓之功效,用于血虚萎黄、心悸怔忡、月经不调、崩漏下血、肝肾阴虚、腰膝酸软、骨蒸潮热、盗汗遗精、内热消渴、眩晕、耳鸣、须发早白等的治疗[1].糖类是地黄含有的一类重要的营养物质和药效组分,主要由地黄多糖(RGP)和地黄寡糖(RGO)组成.本文就RGP和RGO的药理作用进展进行综述分析.
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地黄中糖类的变化对其抗癌作用的影响
地黄Rehmannia glutinosa(gaerth)Libosh为常用的补益类中药,始载于《神农本草经》.其主要活性成分为:环烯醚萜苷等地黄总苷(RTG);地黄多糖a、b(RPS-a、b);水苏糖;棉子糖等糖类.本文试探讨其糖类抗癌作用的机理,及在炮制前后糖类含量变化对该作用的影响.
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地黄多糖诱导骨髓间充质干细胞为神经样细胞后的突触功能
目的:探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞后是否具有神经突触功能.方法:贴壁筛选法分离纯化BMSCs,地黄多糖进行诱导,激光共聚焦显微镜检测细胞在高钾刺激下细胞膜电位的变化,细胞内钙流变化及细胞突触循环功能.结果:地黄多糖诱导24 h,连续培养7d后,光学显微镜下显示诱导后的细胞伸出突起交互成复杂网状；免疫荧光细胞化学显示诱导后的细胞神经元巢蛋白阳性表达率为97.9％±1.3％,神经元特异性烯醇化酶阳性率95.4％±1.9％,突触小泡蛋白阳性率为94.2％±2.2％；激光共聚焦显微镜显示诱导后细胞在高钾刺激下细胞膜电位迅速升高,细胞内钙离子流增加,细胞突触发生了胞吞胞吐现象.结论:地黄多糖可以诱导BMSCs分化为神经样细胞,此细胞具有神经细胞的神经生理功能.
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地黄多糖提取分离技术的研究进展
地黄多糖是中药地黄的主要活性成分之一,具有促进机体造血、增强免疫功能、抗氧化、抗肿瘤活性、降血糖等广泛的药理作用,本文对地黄多糖的提取分离技术进行综述,为进一步研究其作用机制和开发利用提供参考.
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地黄多糖诱导大鼠BMSCs向神经样细胞分化中对Notch信号通路的影响
目的 探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞过程中对Notch信号通路的影响.方法 以大鼠BMSCs为研究对象,取P3～P5代细胞随机分为正常对照组(CON组)与地黄多糖诱导组(RGP组),诱导后连续培养7d.以免疫细胞化学法和Western blotting检测诱导后0、1、3、7d各时点Notch1、Jagged1蛋白和Notch1胞内段NICD蛋白的表达,Real-time PCR检测Notch信号通路相关分子mRNA.结果 免疫荧光法检测显示,RGP组与CON组比较各时点Notch1蛋白表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.01),且随时间变化Notch1蛋白表达阳性率逐渐降低;Jagged1蛋白阳性细胞率从诱导结束0d到诱导后1d具有明显的上升趋势,1d到7d显著下降,各时点比较差异有统计学意义(P＜0.05),CON组与RGP组各时点比较差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blotting检测结果与免疫荧光检测结果相似.Real-time PCR检测显示,RGP组Notch1mRNA随时间变化表达下降,Presenilin1表达先降低后略有回升,Hes1表达下降,Mash1表达升高,Jagged1表达先升高后降低,各时点与CON组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 地黄多糖在诱导BMSCs向神经样细胞分化过程中抑制Notch1蛋白的表达,并影响Notch信号通路相关基因的表达.
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地黄多糖对K562细胞增殖抑制作用及bcr/abl融合基因表达的影响
目的:研究地黄多糖(RPS)对K562细胞bcr/abl融合基因表达和细胞增殖的影响.方法:不同浓度RPS作用于K562细胞,MTS法检测其对细胞增殖的影响,Real-time PCR检测bcr/abl融合基因mRNA表达变化,Western blotting检测bcr/abl融合基因表达的P210蛋白变化.结果:RPS能够抑制K562细胞增殖,用400 μg·mL-1 RPS作用12h,细胞增殖抑制率为35.16％,随着RPS浓度增加抑制作用明显增强(P＜0.05);用200 μg·mL-1 RPS作用24 h,K562细胞内bcr/abl融合基因mRNA相对表达量为0.26,P210蛋白相对含量为0.35.RPS使K562细胞内P210蛋白及bcr/abl融合基因mRNA表达量呈时间和剂量依赖性下降.结论:RPS可能通过下调bcr/abl融合基因mRNA及P210蛋白表达对K562细胞增殖产生抑制作用.
关键词： 地黄多糖 K562细胞 Bcr/abl融合基因 -
从BMP4表达探讨地黄多糖诱导MSCs向神经细胞分化的机理
骨髓间充质干细胞(MSCs)是一种来源于中胚层的成体干细胞,具有较强的可塑性和多向分化潜能.研究已证明体内移值的MSCs能够横向分化为神经元或胶质细胞,能促进损伤区神经组织再生修复,改善损伤区的神经功能[1],在特定的培养条件下还可分化为神经元样细胞[2].我们前期研究已证明地黄多糖能更有效地促进MSCs分化为神经细胞[3-4].有研究[5]显示BMP4是龟版调控MSCs增殖、并诱导MSCs分化为神经元样细胞和向成骨方向转化的可能途经之一.BMP4是一种高效骨诱导物质,又是神经发育的主要相关蛋白.
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地黄多糖对 SD大鼠骨髓间充质干细胞骨向诱导的实验研究
目的：：观察地黄多糖对 SD 大鼠骨髓间充质干细胞( bone marrow mesenchymal stem cells， BMSCs)增殖及骨向分化的影响。方法：采用全骨髓贴壁法分离培养SD 大鼠骨髓间充质干细胞；MTT 法检测不同浓度地黄多糖在不同时间点(1、3、5、7、9，、11 d)对大鼠 BMSCs 增殖情况的影响；对硝基苯磷酸盐(pNPP)法检测不同浓度地黄多糖在不同时间点(3、7、14 d)对细胞上清中 ALP 活性的影响；茜素红染色法检测不同浓度地黄多糖对 BMSCs 矿化能力的影响。结果：地黄多糖可以促进BMSCs 增殖，其佳浓度为50μg/mL， P<0.05；同时可以促进 BMSCs向成骨分化，其佳浓度也为50μg/mL，P<0.05。结论：地黄多糖具有促 BMSCs 增殖及骨向分化的作用。
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地黄多糖在诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化过程中对Notch1蛋白表达的影响
目的 探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的作用,及其对Notch1蛋白表达的影响.方法 以大鼠BMSCs为研究对象,取第3代细胞,分为对照组、β-巯基乙醇诱导组(5 mmol/L BME)和地黄多糖诱导组(0.2 mg/mL)进行诱导实验,应用流式细胞仪检测诱导前后细胞生长周期改变情况,免疫细胞化学染色法检测神经标志物:神经巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Notch1蛋白的表达,Western blot检测Notch蛋白胞内片段(NICD)的表达情况.结果 流式细胞仪检测示地黄多糖诱导后G0/G1期细胞比例明显升高,而S+G2/M期的细胞比例明显下降.免疫细胞化学染色显示,对照组不表达神经细胞标志物,各诱导组诱导后产生特异性神经细胞标志物表达.其中地黄多糖组nestin及NSE阳性细胞率高于β-巯基乙醇诱导组(P<0.05);GFAP阳性细胞率低于β-巯基乙醇诱导组,差异有统计学意义(P<0.05);免疫细胞化学染色示地黄多糖诱导组诱导前为Notch1蛋白强阳性或阳性染色,并随诱导时间延长阳性细胞逐渐减少.Western blot结果显示地黄多糖诱导组诱导分化24 h后细胞内NICD含量逐渐下降,到第5天时,低于诱导前水平,且仍明显低于对照组.结论 地黄多糖可能通过抑制Notch1蛋白表达而诱导BMSCs向神经样细胞分化,且主要向神经元样细胞方向分化.
