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芍药苷对TNF-α诱导的内皮细胞TNFR1/NF-κB信号通路的抑制作用
目的 研究芍药苷(paeoniflorin,PAE)对TNF-α诱导小鼠肾动脉内皮细胞TNFR1介导信号通路的抑制作用,试探讨其作用的分子机制.方法 体外培养小鼠动脉内皮细胞.采用Western blot方法检测正常组(无血清培养基培养)、TNF-α组(无血清培养基培养2h加TNF-α30ng/mL 6 h)、PAE低浓度组(PAE 0.8 μmol/L培养2h加TNF-α 30ng/mL 6 h)、PAE中浓度组(PAE 8μmol/L培养2h加TNF-α30ng/mL 6 h)及PAE高浓度组(PAE 80 μmol/L培养2h加TNF-α30ng/mL 6 h)细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)的蛋白表达;以免疫荧光法检测正常组(无血清培养基培养)、TNF-α组(无血清培养基培养2h加TNF-α 30ng/mL 45 min)、PAE高浓度组(PAE 80 tμmol/L培养2h加TNF-α 30ng/mL 45 min)核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的核转位;以Western blot法检测正常组(无血清培养基培养)及PAE高浓度组(PAE 80 μmol/L培养2h)ph-ERK和ph-p38表达;Western blot法检测正常组(无血清培养基培养)、TNF-α组(无血清培养基培养2h加TN F-α 30ng/mL30 min)、PAE高浓度组PAE 80μmol/L培养2h加TNF-αr 30ng/mL 30 min)、p38抑制剂组(SB组,p38抑制剂SB238025 25 μmol/L预处理30 min,PAE 80 μmol/L处理2h,后TNF-α 30 ng/mL30 min)及ERK抑制剂组(PD组,ERK抑制剂PD98059 50 μmol/L处理30 min,PAE 80 μmol/L处理2h,后TNF-α30 ng/mL 30 min)IκBα蛋白表达.结果 与正常组比较,TNF-α组ICAM-1蛋白表达明显升高(P＜0.01);与TNF-α组比较,PAE高浓度组的ICAM-1表达受到显著抑制(P＜0.05).PAE高浓度组ph-p38及ph-ERK蛋白表达水平明显较正常组升高(P＜0.05).与正常组比较,TNF-αα组IκBα表达水平下降(P＜0.01).与TNF-α组比较,PAE高浓度组可显著抑制TNF-α诱导的IκBα蛋白降解(P＜0.01),SB组可显著阻断PAE对IκBα蛋白降解的抑制作用(P＜0.05).正常组中NF-κB/p65信号主要位于胞浆中,TNF-α组在TNF-α刺激45 min可诱导NF-κB/p65由胞浆向细胞核转位,而PAE高浓度组可显著抑制TNF-α诱导的NF-κB/p65核转位.结论 PAE抑制TNF-α诱导的ICAM-1表达,其作用与抑制TNFR1/NF-κB信号通路有关,p38参与介导此作用.
关键词： 芍药苷 内皮细胞 肿瘤坏死因子-α Ⅰ型受体信号通路
