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重组痘病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其免疫原性分析
对牛痘病毒弱毒株表达的SARS冠状病毒纤突蛋白(Spike protein,S)的免疫原性进行分析与比较.以减毒痘病毒(WR株)为载体重组了SARS冠状病毒全长S基因(rWR-SARS-S).SDS-PAGE和Western blot试验表明,迁移率约为190kD的重组SARS S蛋白可在HeLa细胞中表达,而且可以被鸡抗SARS全病毒高免血清识别,具有特异免疫反应原性.进一步研究表明,rWR-SARS-S感染的细胞在IFA试验中可与鸡抗SARS的高免血清发生特异反应,具有良好的敏感性和特异性.以104PFU的rWR-SARS-S免疫BALB/c小鼠产生的抗体在间接ELISA试验中可以被S蛋白识别,产生特异抗原抗体反应.利用痘病毒表达的SARS冠状病毒S蛋白具有良好的抗原性和生物学活性,可替代SARS冠状病毒全病毒,为研究安全、敏感和特异的重组诊断抗原奠定了重要基础.
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中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)中和单抗研制技术进展
中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)2012年在中东地区的大暴发及其快速传播能力,已成为了全球科研工作者关注的重点,寻找有效的治疗和预防措施对MERS-CoV感染防治起着至关重要的作用.临床研究证实,病毒感染者恢复期血清中含有大量的中和抗体,并具有有效的临床治疗作用,说明中和抗体能有效、安全的作为病毒感染治疗手段.纤突(spike,S)蛋白是介导MERS-CoV感染宿主细胞的关键结构蛋白,是目前此病毒中和性单抗研究的关键位点.本文综述了MERS-CoV S蛋白结构特点、中和性单抗制备免疫原类型及不同种类中和性单抗的制备方式,并结合当前研究现状展望了MERS-CoV中和单抗研发前景.
关键词： 中东呼吸综合征冠状病毒 单克隆抗体 中和 纤突蛋白 受体结合区 -
三种人冠状病毒纤突蛋白与人受体分子对接研究
[目的]通过对急性呼吸窘迫综合症冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)、NL63型冠状病毒NL63 (human coronavirus NL63,NL63-CoV)和中东呼吸道冠状病毒(Middle-East respiratory syndrome eoronavirus,MERS-CoV)纤突蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)与人受体相互作用的蛋白质结构进行分析,探索计算机计算模拟技术在研究蛋白质-蛋白质相互作用中的价值.[方法]根据发表的蛋白质结构数据,使用ZDOCK软件包进行配体-受体分子对接模型构建,利用RDOCK软件包对分子对接结果进行评分.比较晶体结构数据和模型数据,以评分结果评价计算机模拟的效果.[结果]计算机模拟配体-受体分子对接研究结果显示SARS-CoV与hACE2对接复合物近天然构象模型16个、NL63-CoV与hACE2复合物近天然构象43个、MERS-CoV与CD26复合物近天然构象5个;对接模型与晶体结构贴合比对后主链间均方根偏差小值为0.291 (A),大值为2.011 (A).其中,SARS-CoV、NL63-CoV与hACE2相互作用通过单个位点的氨基酸残基间盐桥实现,而MERS-CoV与CD26相互作用通过两个不同位点残基间的盐桥作用实现.[结论]冠状病毒蛋白质-人受体分子对接模拟研究结果与已发表的分子生物学实验所得到结果一致,提示通过计算模拟的方法可以实现病毒入侵机理的初步探索.然而在模拟实验过程中,如果有分子生物学实验数据支持,计算机模拟研究将更高效、准确和稳定.
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不同型犬腺病毒纤突蛋白基因序列的比较分析
根据已发表的CAV纤突基因序列,用PCR方法,对4个CAV-2毒株和4个CAV-1毒株的纤突基因进行了扩增和测序,测定的核苷酸序列经推导得到分别编码543和542个氨基酸的CAV纤突蛋白全序列.测定的CAV2比较表明:我国流行的CAV-2 SY强毒株与国外标准强毒株Toronto A26/61株柏同,其驯化致弱的毒株与驯化前相比在1134位发生碱基颠换.测定的CAV-1比较表明:我国流行的CAV-1株与标准强毒RI261株差异相对较大,而国内CAV-1毒株互相之间相对差别较小.CAV-2与CAV-1纤突基因的同源性为80.48%.
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中东呼吸综合征冠状病毒疫苗动物实验获得成功
中东呼吸综合征自2012年被发现以来发病患者1118~1142例，死亡者达423~465例。该病由中东呼吸综合征冠状病毒(Middle east respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)引起，至今尚无有效的治疗方法。近期，研究人员基于编码MERS-CoV外部一种特殊纤突蛋白的DNA研制出了MERS-CoV疫苗。经小鼠和猕猴的动物试验结果表明，新疫苗针对MERS-CoV约旦N3毒株(MERS-CoV JordanN3 strain)产生免疫力。相关论文在线发表在《Nature Communications》杂志网站上。
