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人乳头瘤病毒引起裸鼠生殖系统病变的研究
重组的腺病毒Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7在293细胞中包装后得到上清液,将Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7病毒上清液以及做为对照的重组腺病毒空载体pAd-CMV和pAdtrack-K14的上清液,经过纯化后,通过裸鼠的尾缘静脉注射到裸鼠体内,每天注射0.05mg雌激素给注射病毒的裸鼠,同时做对照.12周后给裸鼠注射2.5%的阿佛丁进行麻醉,取其子宫、阴道、卵巢、乳腺等组织,浸泡在3.75%的多聚甲醛中4℃固定过夜,做石蜡包埋切片、HE染色、免疫组化检测P53蛋白和Bel-2蛋白的表达,取裸鼠的各个组织提取DNA、RNA和蛋白质,然后分别检测有无重组腺病毒的感染、病毒表达的情况及E6蛋白的表达.HE染色结果显示注射腺病毒Ad-K14-E6/E7的裸鼠(实验组2)子宫颈-子宫体移行组织增生明显.SP法免疫组化检测突变型P53和Bcl-2在该组裸鼠的子宫基质细胞表达增加,并且RT-PCR检测该组裸鼠子宫组织也有E6/E7的表达,Western Blot检测该组子宫组织也有E6蛋白的表达.动物实验结果表明K14启动子增加了E6/E7在裸鼠子宫组织的表达,同时也发现该组裸鼠的子宫颈-子宫体移行组织有增生改变.
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HPV E6/E7基因和HPV L1基因DNA检测的比较及意义
目的：比较宫颈组织人乳头瘤病毒16亚型中HPV早期基因(E6/E7)和晚期基因(L1)的检出情况，并分析其作为宫颈癌及癌前病变评价的意义。方法：选择高危型(HR)-HPV16亚型的E6/E7区基因和HR-HPV的L1区基因设计特异性引物，优化条件，建立高危型HPV16分型检测方法。分别收集宫颈组织慢性宫颈炎22例，宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌54例共76例组织标本，根据病理学诊断结果分为两组，对照组(慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CINⅠ级)和高级别宫颈病变组(CINⅡ级、CIN Ⅲ级、宫颈鳞癌)，抽提DNA，采用新建立的方法对HPV早、晚期基因进行PCR检测，同时与临床的杂交捕获二代法(HCⅡ)检测的HPV L1基因进行比较。结果：成功建立了敏感、特异的基于E6/E7和L1基因的PCR检测方法， E6/E7基因HPV16分型检测阳性率为55.3%(42/76)，HPV L1和HCⅡ-HPV L1检测阳性率均为25.0%(19/76)，E6/E7基因阳性率明显高于HPV L1和HCⅡ-HPV L1，差异有统计学意义(P<0.01)；而HPV L1和HCⅡ-HPV L1基因阳性率的差异无统计学意义(P>0.05)。对照组的HPV E6/E7、HPV L1和HCⅡ-HPV L1阳性率分别为29.0%、9.7%和12.9%，显著低于高级别宫颈病变组的73.3%、35.6%和33.3%(P<0.05)。HPV早期基因(E6/E7)与晚期基因(L1)检测结果关联性分析，对照组HPV E6/E7与HPV L1的检测结果有关联(P<0.05)；高级别宫颈病变组HPV E6/E7与HPV L1的检测结果有关联(P<0.01)；其余检测结果均没有关联(P>0.05)。结论：HPV E6/E7基因比L1基因检测更具灵敏、高效、实用的特点，将E6/E7基因HPV16亚型阳性检测结果与CINⅡ以上病理诊断结果相结合，可作为预测评价临床早期宫颈病变及宫颈癌的有效方法之一。
关键词： 人乳头瘤病毒16亚型 E6/E7基因 L1基因 聚合酶链式反应 -
HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值探讨
目的 探讨HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值.方法 选取宫颈病变筛查的受试者407例为研究对象,均行宫颈薄层液基细胞学(TCT)检查,并检测细胞学标本中HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA的表达.215例行阴道镜宫颈活检,结合组织病理诊断结果进行统计分析.结果 407例细胞病理学诊断结果:正常范围(WNL) 192例(47.17％)、意义不明的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS) 106例(26.04％)、低度鳞状上皮内病变(LSIL) 70例(17.20％)和高度鳞状上皮内病变(HSIL) 39例(9.58％).诊断为LSIL和HSIL患者中,HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检出率差异无统计学意义(P＞0.05);诊断为ASCUS患者中,HPV DNA检出率显著高于HPV E6/E7 mRNA(P＜0.01).215例组织病理学诊断结果:正常109例,阴性106例,包括CIN Ⅰ级44例、CINⅡ级27例、CINⅢ级32例、宫颈鳞癌3例.对于诊断为CINⅡ级、CINⅢ级/宫颈癌患者,HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏度、特异度和阳性预测值差异无统计学意义(P＞0.05),但HPV E6/E7 mRNA检测的阴性预测值和准确度显著高于HPV DNA检测(P＜0.05或P＜0.01).结论 HPV E6/E7 mRNA检查较HPV DNA检查能更好地评估HPV感染患者宫颈病变恶化风险,联合TCT检测对提高宫颈癌早期筛查和诊断的准确度具有积极意义.
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HPV16 E6/E7基因及蛋白表达与宫颈癌的相关性研究
目的研究人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6/E7基因及其蛋白表达在宫颈疾病及其癌变中的作用.方法运用PCR技术检测51例宫颈癌(癌症组)、20例宫颈上皮瘤变(CIN) Ⅱ～Ⅲ级(CIN组)、20例宫颈炎(炎症组)患者病变组织中HPV16 E6/E7基因,并运用免疫组化SP法检测癌症组癌组织中HPV 16E6、E7的表达情况.结果癌症组、CIN组、炎症组HPV16 E6检出率分别为5%、35%、45%,后两者明显高于前者(P<0.05);HPV16 E7检出率分别为65%、75%、68.6%,P均>0.05; 癌症组45例HPV16 E6和42例E7蛋白阳性表达(88.2%、82.3%).HPV16 E6蛋白表达与临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结有无转移均无相关性(P>0.05);HPV16 E7蛋白表达与临床分期和淋巴结有无转移相关(P<0.05),与肿瘤分化程度无相关性(P>0.05).结论 HPV16E6/E7基因与宫颈疾病及其癌变的关系密切.
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2013年-2015年舟山海岛地区人乳头状瘤病毒E6/E7基因变迁分析
目的 调查和分析2013年-2015年舟山地区妇女的人乳头状瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA阳性率变迁.方法 选取2013年1月-2015年12月在本院就诊的本地常住妇女503例,采集宫颈脱落细胞,荧光定量PCR法检测HPV E6/E7 mRNA表达,以HPV E6/E7 mRNA＞ 103为阳性.结果 共计HPV E6/E7 mRNA阳性88例,总阳性率为17.49％.≤30岁组中,2015年的HPV E6/E7 mRNA阳性率高于2014年,差异有统计学意义(x2=4.08,P＜0.05),≥41岁组中,2015年的HPV E6/E7 mRNA阳性率高于2014年,差异有统计学意义(x2=8.92,P＜0.01).2015年的乡村组HPV E6/E7 mRNA阳性率高于2014年,差异有统计学意义(x2=11.14,P＜0.01).结论 舟山地区≥41岁和乡村妇女是HPV E6/E7 mRNA阳性高发人群,有必要对其加强宫颈癌病变监控.
关键词： 人乳头状瘤病毒 荧光定量聚合酶链式反应 E6/E7基因 -
HPV 58在宫颈癌组织中的感染分析及其转化基因的克隆
目的 分析中国陕西宫颈癌组织中HPV58的感染情况并克隆其E6、E7主要转化基因.方法 采用HPV GP5+/GP6+通用引物PCR 扩增58例宫颈癌组织DNA粗提物,继之将荧光偏振技术与模板指导的末端延伸反应(TDI-FP)结合,应用探针杂交延伸反应检测HPV58.用特异性引物随机从1例 HPV58 阳性标本中PCK 扩增HPV58 E6、E7基因,将其分别与pGEM-T Easy载体连接,所获得的重组质粒经内切酶消化和测序鉴定.结果 58例宫颈癌标本中10例(17.24%)为HPV 58阳性,克隆获得的HPV 58 E6、E7重组质粒经BLAST分析证实分别含有HPV 58完整的E6、E7基因,与GenBank收录的标准株比较,E6、E7基因分别有5个和2个硷基发生变异,可导致相应的蛋白质氨基酸序列中分别有4个和1个氨基酸替换.结论 中国陕西人宫颈癌组织中HPV 58感染较为多见,且HPV 58 E6和E7转化基因的硷基序列与标准株有所差异.本研究为下一步HPV 58相关肿瘤诊断试剂及疫苗的研制奠定了基础.
