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疱疹病毒VP16研究进展
疱疹病毒VP16蛋白是疱疹病毒重要的皮层蛋白,参与病毒立即早期基因转录的激活、病毒在宿主细胞内的装配与释放等过程,与许多病毒蛋白和宿主蛋白都存在蛋白相互作用,且部分疱疹病毒VP16具有去泛素活性以及帮助病毒抵御宿主免疫的功能.本文将以疱疹病毒VP16蛋白的结构特点为基础来阐述VP 16的功能及其复杂的相互作用,为深入研究疱疹病毒的成熟过程以及VP16涉及的相互作用提供参考.
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耐核糖核酸酶内含长片段嵌合体RNA的病毒样颗粒的构建和表达
目的 通过改变原噬菌体ms2包膜蛋白RNA包装位点(19碱基的茎环结构)的数量及亲和力,构建新的原核表达系统,探讨表达内含长片段(达到理论上的1 900 bp)RNA的耐RNase病毒样颗粒的可能性.方法 首先设计含Hind Ⅲ和Not Ⅰ酶切位点的引物,扩增ms2包膜蛋白的编码成熟酶蛋白和衣壳蛋白的1 700 bp序列,并将原来的19mer的包装位点序列改变为C-5变异体(19 bp stem-loop结构中-5位的尿嘧啶改变为胞嘧啶),Hind Ⅲ和Not Ⅰ酶切后,与用同样酶切的表达载体pET-28(b)相连接,得到重组载体pET-ms2-pac.应用重叠PCR扩增3种病毒的5段嵌合体序列(包括3段SARS-CoV基因、一段HCV基因和一段HSN1基因),并在SARS-CoV3和HCV序列之间插入一个19mer的变异体包装位点序列,在设计引物时,使嵌合体两端含有Not Ⅰ酶切位点,与Not Ⅰ酶切的重组载体pET-ms2-pac相连接,构建得到具有2个变异包装位点的表达载体pET-ms2-3V.同时构建3种对照重组表达载体,分别测定N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V 4种重组表达质粒表达产物的260 nm吸光度(A260)值,根据公式A160=0.125 mg/ml计算4种表达产物的表达效率.结果 成功构建了4种原核表达载体:pET-ms2-3V、P-3V-pET-P、N-P3V-pET-P和N-P3V-pET-C.pET-ms2-3V和P-3V-pET-P经原核表达后得到含全长为1 891的5段嵌合体RNA的病毒样颗粒;N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C其原核表达产物病毒样颗粒中仅包装了1 200 bp的目的 嵌合体RNA.N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V的表达效率分别为0.23、0.35、0.35和0.51 mg/ml.N-P3V-pET-C比N-P3V-pET-P表达效率高52%,而pET-ms2-3V比P-3V-pET-P表达效率高38%.所包装的RNA具有耐RNase和DNase消化的特性以及良好的不同温度条件下的稳定性.结论 通过改变噬菌体ms2 RNA包装位点(19碱基的茎环结构)的数量,可构建能表达内含达到理论上的约1 900 bp外源RNA的耐RNase病毒样颗粒的原核表达载体平台.通过应用包装位点的变异体C-变异体,可以增加病毒样颗粒的表达效率.
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结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在HIV-1晚期复制的作用及其抑制剂
人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)复制的晚期阶段是整个复制周期中的关键环节.该阶段HIV-1经装配、出芽释放和成熟过程产生能感染新靶细胞的成熟病毒颗粒.结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在此阶段发挥着重要作用,它通过协同自身不同区域,有利于蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA和蛋白质-脂质相互作用,从而促进成熟感染病毒颗粒的产生.针对此阶段设计的药物,可有效地阻断HIV-1成熟,从而抑制病毒感染.本文综述了结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在HIV-1晚期复制的作用及其抑制剂的研究进展.
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慢病毒载体的构建及优化
目的:针对慢病毒载体的基因组装、转导及基因表达的优化论述,及不同种属的慢病毒载体的低活性加以说明,同时对慢病毒遗传体系的产生、转导效率和生物安全性进行总结.资料来源:应用计算机检索Pubmed以及美国SCI和Medline数据库2000-01/2004-12有关慢病毒载体的论文,检索词"lentivirus vectors,immunodeficiency",并限定文章语言种类为English.同时应用计算机检索中国期刊网数据库1995-01/2005-12有关慢病毒载体构建的文章,限定文章语言种类为汉语,检索词"慢病毒载体".资料选择:对检索到的相关信息及文章进行整理,选取针对性强的文章.纳入标准:①临床研究性文章.②基础研究文章.排除标准:①其他病毒载体的结构文献以及重复性资料.②诸多病毒实验应用性文献.③重复同一研究.资料提炼:共收集到198篇关于慢病毒结构原理的相关文献,其中包括英文文献150篇,中文文献48篇,有21篇符合纳入标准.资料综合:介绍不同源慢病毒载体的构建和慢病毒的基因位点.影响基因转移的一个主要因素是细胞的基因表达.人类转基因载体的一个重要特点是可以调节转基因的表达.调节转基因信号的另一个途径是运用可切割的前病毒产物.转基因载体是建立在逆转录病毒之上,主要包括肿瘤逆转录病毒和慢病毒,这些病毒载体系统是哺乳动物细胞外源基因传递、整合和表达的有效途径.结论:蛋白酶、rev.慢病毒蛋白和VSV/G糖蛋白均具有细胞毒性和抑制细胞的作用,当连续表达时要求使用诱导表达系统.
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菜粉蝶野田村病毒感染宿主的病理学变化及病毒的装配
应用光学组织切片和电镜超薄切片技术对菜粉蝶新的野田村病毒感染菜青虫幼虫的组织病理学和超微病理学变化以及菜青虫颗粒体病毒混合感染后的病理学变化进行了研究.结果表明该病毒只在菜青虫中肠细胞质内增殖.病毒侵染时,线粒体、内质网等细胞器均发生显著病变.该病毒与前人报告的能侵染菜青虫的其它病毒均有所不同.本文还讨论了野田村病毒的装配.
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SARS病毒的形态结构及其在体外培养细胞中的感染装配
人冠状病毒1965年由Tyrrell等从人胎儿器官培养(HET-OC)中初分离.其后Hamre和Kapikian等从组织培养中分离了病毒[4].
