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miR-1247-5p对Smad2基因的靶向调控作用
目的 利用miR-1247-5p过表达模拟物mimics,研究miR-1247-5p对TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的靶向调控作用.方法 合成模拟miR-1247-5p过表达的模拟物mimics,及抑制miR-1247-5p表达的抑制物inhibitors;同时构建与miR-1247-5p互补靶基因Smad2的3'非翻译区,将其克隆到线性化的Report荧光报告载体中.将测序鉴定阳性的report-Smad2 3'-UTR重组质粒,与miR-1247-5p的mimics/inhibitors共转染至HEK-293T细胞,通过relative luciferase activity实验验证靶向关系,并通过Western blot实验进一步检测Smad2蛋白表达水平.结果 成功构建report-Smad2 3'-UTR重组质粒,Western blot实验表明转染miR-1247-5p mimics组中Smad2蛋白表达下调(P＜0.05);而转染miR-1247-5p inhibitors组中,Smad2蛋白表达上调(P＜0.05).结论 证实miR-1247-5p直接靶向TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的表达,在蛋白水平对其进行调控,为进一步研究miRNA在细胞通路中的调控作用提供了依据.
关键词： miR-1247-5p TGF-β信号通路 Smad2基因 肿瘤 -
5-杂氮-2'脱氧胞苷对肝癌细胞SMMC-7721 miR-1247-5p基因表达及其启动子区甲基化的影响
目的 观察正常人肝细胞系LO2和肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p的表达,研究去甲基化药物5-杂氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p表达及其基因启动子区CpG岛甲基化水平的影响.方法 用不同浓度(0、5和10 μmol/L)去甲基化药物5-杂氮-2'脱氧胞苷处理SMMC-7721细胞,用甲基化特异性PCR法检测miR-1247-5p基因启动子区甲基化水平;用SYBR Green qReal Time PCR法检测miR-1247-5p的表达.结果 与正常人肝细胞系LO2相比,肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p表达降低(P＜0.05)且其基因启动子区CpG岛甲基化水平高;经去甲基化药物干预后miR-1247-5p的表达较对照组有明显上调(P＜0.01),且其基因启动子区CpG岛甲基化水平降低.结论 miR-1247-5p基因甲基化调控可能参与了肝癌的发生.
关键词： 肝癌细胞 miR-1247-5p 甲基化 5-杂氮-2'脱氧胞苷
