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HBSP抑制缺氧复氧心肌H9C2细胞Omi/HtrA2胞内转位及细胞凋亡
目的 探讨促红细胞生成素衍生肽(HBSP)对缺氧复氧心肌细胞Omi/HtrA2胞内转位及细胞凋亡的影响.方法 将乳鼠心肌细胞(H9C2细胞)分为对照(Ctrl)组、缺氧复氧(H/R)组、HBSP组和EPO组.培养结束后MTS法检测细胞存活率,酶标仪检测细胞上清液中LDH释放率,Western blot检测细胞内cleaved caspase-3表达,TUNEL法检测心肌细胞凋亡;分离H9C2细胞胞质及线粒体,Western blot分别检测线粒体及细胞质Omi/HtrA2表达.结果 与Ctrl组相比,H/R组细胞存活率下降(P＜0.05),LDH释放、cleaved caspase-3表达、心肌细胞凋亡及Omi/HtrA2胞内转位均明显上升(P＜0.05);与H/R组相比,EPO组的细胞存活率升高(P＜0.05),LDH释放降低、cleaved caspase-3表达减弱、心肌细胞凋亡减少、Omi/HtrA2线粒体转位明显减少(P＜0.05);随着HBSP浓度的增加,各组细胞存活率逐渐上升,LDH释放、cleaved caspase-3表达、心肌细胞凋亡及Omi/HtrA2胞内转位率逐渐下降(P＜0.05).结论 HBSP具有与EPO类似的保护作用,可抑制经H/R诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能是通过减少Omi/HtrA2蛋白的胞内转位,抑制caspases通路激活,进而发挥细胞保护作用.
关键词： 缺氧复氧 促红细胞生成素衍生肽 促红细胞生成素 细胞凋亡 Omi/HtrA2 -
促红细胞生成素衍生肽的组织保护作用研究进展
促红细胞生成素(EPO)因其促进造血功能而广泛用于临床。近年来大量实验证实，大剂量EPO能够通过抗氧化应激、抗凋亡、抗炎症等效应发挥组织保护作用，但会产生血栓及高血压等不良反应，临床效果不佳。而促红细胞生成素衍生肽(HBSP)既保留了EPO的组织保护活性又无EPO的副作用，近年来备受关注。新报道证实， HBSP通过抗凋亡、抗炎、抗氧化应激对神经系统、心脏、肾脏等发挥多种组织保护作用，具有良好的临床应用前景。
关键词： 促红细胞生成素衍生肽 促红细胞生成素 组织保护作用 -
促红细胞生成素衍生肽抑制大鼠心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的作用研究
目的：探讨促红细胞生成素衍生肽（HBSP）抑制大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）缺血/再灌注损伤的作用及其机制。
方法：分离培养大鼠CMECs，建立缺血/再灌注损伤模型，随机分为对照组、模拟缺血/再灌注组（SI/R组）、SI/R＋重组人促红细胞生成素组（SI/R+rhEPO组）、SI/R＋HBSP组；HBSP分别选择2.5 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml四个浓度，通过噻唑蓝（MTT）比色实验检测CMECs增殖能力以确定药物作用的适浓度。而后采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定（TUNEL）法检测细胞凋亡率来进一步验证其保护作用。研究保护机制的实验分组为：对照组、SI/R组、SI/R＋HBSP（HBSP适浓度为25 ng/ml）组、SI/R+HBSP+磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）抑制剂（LY294002）组、SI/R+HBSP+雷帕霉素组，采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、核糖体S6蛋白激酶（p70S6K）等蛋白的表达及其磷酸化水平。
结果：与SI/R组比，SI/R+rhEPO组和SI/R+HBSP组CMECs增殖能力明显上升（P<0.05），凋亡率显著下降（P<0.01），迁移能力增强。用抑制剂LY294002及雷帕霉素处理后，与SI/R组相比，SI/R+HBSP组AKT、mTOR及p70S6K的磷酸化水平均显著提高（P<0.05）；与SI/R+HBSP组相比，SI/R+HBSP+LY294002组的AKT、mTOR及p70S6K的磷酸化水平均显著下降（P<0.05），SI/R+HBSP+雷帕霉素组mTOR磷酸化水平及p70S6K磷酸化水平显著下降（P<0.05）。
结论：HBSP能够抑制缺血/再灌注诱导的CMECs的损伤，其保护作用可能与PI3K-AKT/mTOR信号通路激活有关。关键词： 促红细胞生成素衍生肽 心肌微血管内皮细胞 缺血/再灌注损伤 细胞凋亡 -
促红细胞生成素衍生肽对小鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究
目的：探讨促红细胞生成素衍生肽（HBSP）对小鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的作用及其机制。
方法：64只雄性ICR小鼠随机分成四组，每组16只：假手术组、MIRI组、HBSP组、HBSP+胞外信号调节蛋白激酶1/2( ERK1/2)特异性阻断剂( PD98059)组( HBSP+ PD98059组)。通过结扎小鼠冠状动脉左前降支45 min后解除结扎线建立小鼠心肌缺血再灌注模型，HBSP于再灌注前5 min给药。再灌注2 h后，用2，3，5-氯化三苯基四氮唑( TTC )和伊文氏蓝( EB )双染色法检测小鼠心肌梗死面积，原位缺口末端标记法（TUNEL法）检测心肌细胞凋亡率，蛋白免疫印迹（Western blot）法检测ERK1/2和磷酸化ERK1/2的表达。
结果：缺血再灌注2 h后，与MIRI组相比，HBSP组心肌梗死面积显著缩小（P<0.05），心肌细胞凋亡率降低（P<0.05），ERK1/2的磷酸化水平升高（P<0.05），差异均有统计学意义。与HBSP组相比，HBSP+PD98059组的ERK1/2磷酸化水平明显降低，心肌细胞凋亡率升高，心肌梗死面积明显增大（P均<0.05），差异均有统计学意义。
结论： HBSP可通过抑制心肌细胞凋亡，缩小心肌梗死面积，在小鼠心肌缺血再灌注损伤中发挥保护作用，其机制与ERK1/2通路的激活有关。关键词： 缺血再灌注损伤 促红细胞生成素衍生肽 细胞凋亡 -
促红细胞生成素衍生肽对顺铂诱导急性肾损伤的保护作用
目的 研究促红细胞生成素衍生肽HBSP对顺铂诱导急性肾损伤的保护作用以及作用机制.方法 65只健康雄性清洁级SD大鼠,随机分为对照组,顺铂组、EPO组、HBSP组.分布检测大鼠血肌酐、尿素、血常规以及肾小管上皮细胞凋亡、肾脏组织TNF-α、NF-κB表达水平、尿Kim-1、NGAL水平.结果 EPO组与HBSP组血肌酐和尿素、尿Kim-1与NGAL以及肾组织Tunel染色阳性百分比、免疫组化染色TNF-α、NF-κB肾脏表达水平较对照组升高,与顺铂组相比均显著下降.各组红细胞计数和血红蛋白与对照组比较差异无统计学意义.结论 HBSP对顺铂诱导的急性肾损伤具有保护作用,其机制可能与抑制炎性反应以及细胞凋亡有关.
关键词： 促红细胞生成素衍生肽 顺铂 急性肾损伤 -
新型促红细胞生成素衍生肽对毛果云香碱致急性癫(癇)小鼠的神经保护作用及机制探究
目的 探究新型促红细胞生成素衍生肽(DEPO)对毛果云香碱致急性癫(癇)小鼠的保护作用,借助N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)损伤神经元模型初步探讨DEPO的作用机制.方法 ①健康成年C57BL/6小鼠随机分为DEPO组(DEPO 500 μg·kg-1)、EPO组(EPO 50μg·kg-1)、溶剂组(ACN+Milliq,0.2 mL/只)、生理盐水组(生理盐水,0.2 mL/只).腹腔注射毛果云香碱建立急性癫(癇)小鼠模型,比较各组干预后癫(癇)发作潜伏期、发作严重程度、死亡率的差异.②采用NMDA兴奋性毒性损伤神经元模型,分为DEPO组(DEPO 100 μg·mL-1干预)、EPO组(EPO 5 μg·mL-1干预)、对照组和正常组,检测各组乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞存活率(MTT法).③拮抗EPOR实验,设置EPO+anti-EPOR组,DEPO+anti-EPOR组,提前4h加入anti-EPOR(1∶100,biorbyt)中和EPOR,检测LDH释放率和细胞存活率.结果 DEPO组和EPO组癫(癇)发作潜伏期分别较溶剂组、生理盐水组显著延长(P＜0.05、P＜0.001).各组间死亡率、癫(癇)发作严重程度比较,差异无统计学意义.DEPO组和EPO组LDH释放率较对照组显著降低(P＜0.01),细胞存活率较对照组显著增高(P＜0.001).DEPO+anti-EPOR组、EPO+anti-EPOR组的LDH释放率分别较DEPO组和EPO组显著增高(P＜0.01),细胞存活率分别较DEPO组和EPO组显著降低(P＜0.001).结论 新型DEPO可以显著延长毛果云香碱致急性癫(癇)小鼠的癫(癇)发作潜伏期,并通过EPOR介导其减轻NMDA诱导的神经元兴奋性毒性损伤,发挥神经保护作用.DEPO在癫(癇)治疗中存在可能的应用前景.
关键词： 促红细胞生成素 促红细胞生成素衍生肽 神经保护 癫(癇) 抗凋亡 -
新型促红细胞生成素衍生肽的制备
目的 制备一种不具有促红细胞生成作用的新型促红细胞生成素(EPO)的衍生肽(DEPO).方法 9-芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成法制备合成新型DEPO,质谱法检测鉴定DEPO相对分子质量,高效液相色谱法鉴定DEPO纯度.健康成年C57BL/6小鼠随机分为EPO(EPO 50 μg·kg-1) 组、DEPO低剂量(DEPO 50 μg·kg-1)组、DEPO高剂量(DEPO 500 μg·kg-1)组、生理盐水(生理盐水,0.2 mL)组和溶剂 (ACN+Milliq,0.2 mL) 组,隔日1次腹腔注射给药,各组于第3、7、14和30天取尾静脉血检测红细胞数变化,探究DEPO对促红细胞生成活性的影响.结果 合成了一个新型、由37个氨基酸构成的DEPO,相对分子质量为3814.8,纯度达95.25%.EPO组给药第3~30天红细胞数呈上升趋势,第14和30天较第3天显著增高(P<0.001).DEPO低剂量组和DEPO高剂量组红细胞数未见明显增高.结论 本研究合成了一种新型DEPO,其在体内不产生促红细胞生成的不良反应,具有一定的临床应用前景.
关键词： 促红细胞生成素 促红细胞生成素衍生肽 Fmoc固相多肽合成法 -
促红细胞生成素衍生肽治疗顺铂所致急性肾损伤的使用方法探讨
目的:探讨促红细胞生成素衍生肽(HBSP)治疗顺铂导致急性肾损伤的使用方法.方法:将清洁级健康雄性Sprague-Dawly(SD)大鼠85只,随机分为5组,分别为:正常组(5只)、顺铂组(20只)、HBSP1组(20只)、HBSP2组(20只)、HBSP3组(20只).应用全自动生化分析仪观测各组血肌酐、尿素氮.应用双抗体夹心酶标免疫分析法分别测定各组尿液标本中Kim-1和NGAL水平.结果:HBSP3组较HBSP1组、HBSP2组相比,第3、5、7天血肌酐、血尿素以及尿Kim-1、NGAL均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HBSP治疗顺铂所致急性肾损伤,需要频繁使用,才能达到稳定的肾脏保护作用,可能与HBSP作用时间短有关.
关键词： 促红细胞生成素衍生肽 顺铂 急性肾损伤 -
促红细胞生成素衍生肽对横纹肌溶解大鼠急性肾损伤的肾脏保护作用
目的:探讨促红细胞生成素衍生肽(HBSP)能否减轻横纹肌溶解所致急性肾损伤(AKI)大鼠肾损害程度及其机制.方法:将SD大鼠随机分成对照组、AKI组和HBSP干预组(造AKI模型同时静脉注射HBSP);采用大鼠双侧后腿注射甘油建立横纹肌溶解所致AKI动物模型.常规生化方法检测血肌酐、血尿素氮、血肌酸激酶的水平及TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡.结果:与AKI组相比,HBSP干预组血肌酐、尿素氮以及大鼠肾组织tunel阳性细胞占总细胞数百分比均降低(P＜0.05).结论:HBSP对横纹肌溶解所致AKI具有明显保护作用,其机制与抑制细胞凋亡有关.
关键词： 肾功能衰竭 急性 促红细胞生成素衍生肽 横纹肌溶解 急性肾损伤 -
促红细胞生成素衍生肽抑制小鼠糖尿病心肌病损伤的作用研究
目的 探讨促红细胞生成素衍生肽又称螺旋B表面肽(helix B surface peptide,HBSP)在糖尿病小鼠心肌病中的保护作用及其可能机制.方法 80只(20～25)g雄性昆明小鼠随机分为对照组(n=20)、对照+HBSP组(n=20)、糖尿病心肌病(DCM)组(n=20)、DCM+ HBSP组(n=20).链脲佐菌素(STZ)对小鼠腹腔注射诱导1型糖尿病,后1次STZ注射完成后第5日,血糖仪检测小鼠尾静脉血葡萄糖水平,3次测量随机血糖均≥16.7mmol/L的视为糖尿病小鼠.糖尿病小鼠继续喂养12周,小动物超声检测提示心功能减退的为DCM小鼠.从中随机选出20只,腹腔注射HBSP 30 μg/(kg·d),连续4周,为DCM+ HBSP组.采用小动物超声分别检测各组小鼠心功能,TUNEL法检测各组小鼠心肌组织细胞凋亡率,天狼星红染色观察各组小鼠的心肌纤维化程度,Western blot检测心肌组织Akt、p-Akt、GSK3β和p-GSK3β的表达.结果 与DCM组相比,DCM+ HBSP组左室射血分数[LVEF(％)]及左室短轴缩短率[[LVFS(％)]增加(P＜0.05),左心室收缩末期容积(LVESV)和左心室舒张末期容积(LVEDV)降低(P＜0.05)、心肌组织细胞凋亡率降低(P＜0.05)、心肌纤维化程度减少(P＜0.01)、p-Akt表达增加(P＜0.05),p-GSK3β的表达增加(P＜0.01).结论 HBSP能够抑制小鼠DCM心肌细胞凋亡、减轻心肌间质纤维化、改善心功能,Akt-GSK3β通路的激活可能参与了HBSP减轻小鼠DCM损伤的保护作用.
关键词： 促红细胞生成素衍生肽 糖尿病心肌病 细胞凋亡 蛋白激酶B 糖原合成酶激酶3β
