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表达载体法文献资料
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建立稳定抑制死亡相关蛋白激酶表达的细胞系
目的 筛选稳定抑制DAPK表达的PC12细胞系,并观察这些细胞系的生长特性.方法 设计、合成4条RNA干扰序列,连接到pDsRed1-N1-U6质粒载体上,扩增后提取质粒转染到PC12细胞,并同时转染1株空载质粒作为对照,然后通过G418筛选细胞克隆,建立稳定增殖细胞系,再通过Western blot筛选为有效的干扰序列,后用MTT、流式细胞术等检测转染细胞系的生长特性.结果 4条干扰序列均已成功转染并筛选出单克隆细胞系,Westem blot实验结果证实,4条干扰序列中有3条对DAPK的表达有明显的抑制作用,其中以第2条干扰序列的抑制效果为明显.结论 成功建立稳定增殖和抑制DAPK表达的细胞系.
