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RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用
目的探讨RAD51抑制剂RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用及可能的作用机制.方法Western blot法筛选MSH2差异表达的结直肠癌细胞系,MTT法检测不同结直肠癌细胞系对RI-1(10、20、30、40 或50 μmol/L)的敏感性;构建针对MSH2基因的重组shRNA慢病毒表达载体并感染HT29细胞.RI-1(40 μmol/L)处理细胞,流式细胞术检测细胞凋亡的变化;单细胞凝胶电泳实验分析细胞内DNA损伤情况;细胞免疫荧光法检测γ-H2AX foci的形成.结果与对照组相比MSH2缺陷的HCT8细胞有明显细胞凋亡现象(P<0.01);HCT8细胞和HT29 Shmsh2细胞尾部DNA含量、尾长和尾距均较对照组明显增加(P<0.05);HCT8细胞和HT29 Shmsh2细胞内γ-H2AX foci的形成数量较对照组明显增加(P<0.01).结论RAD51抑制剂RI-1可能通过增加细胞内DNA损伤参与RI-1对MSH2缺陷肿瘤的杀伤作用.
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DNA修复相关蛋白RAD51在宫颈癌细胞增殖中的作用
目的 研究DNA修复相关蛋白RAD51对人宫颈癌细胞HeLa和SiHa增殖能力的影响及其可能的机制. 方法 应用免疫组化检测RAD51蛋白在43例人正常宫颈,64例宫颈鳞状细胞癌组织中的表达情况;采用细胞计数法、MTT实验分析RAD51抑制剂RI-1处理(实验组1)和DMSO处理(对照组1)的人宫颈癌细胞HeLa和SiHa细胞体外增殖的变化;用RI-1(实验组2)和等体积生理盐水(对照组2)腹腔灌注于成功移植HeLa或SiHa细胞的裸鼠,分析裸鼠移植瘤瘤体生长、体积及质量的变化.采用流式细胞术检测各组细胞周期分布.Western blot检测抑制RAD51蛋白对细胞周期蛋白cyclin D1与P21水平的影响. 结果 RAD51蛋白在宫颈癌组织中的表达水平[73.44％ (47/64)]明显高于正常宫颈组织[13.95％ (6/43)].与对照组1相比,实验组1 HeLa及SiHa细胞中RAD51表达明显抑制,其细胞生长速度及活性也明显降低(均P＜0.01),且具有时间依赖效应;实验组2裸鼠移植瘤的生长明显减慢,且所成瘤体的平均质量均显著减小(P＜0.01).流式细胞术提示RAD51抑制剂处理后阻断细胞周期的转换.Western blot检测证实RI-1处理后降低了细胞周期蛋白cyclinD1和增加了P21的表达,进而阻断细胞周期的转换. 结论 RAD51通过调节cyclin D1与P21蛋白表达水平引起细胞周期进展停滞,改变宫颈癌细胞及移植瘤体的生长.
