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内源性PS1在活体HEK293和HeLa细胞膜上的定位
目的 检测内源性PS1在活体细胞膜上的定位及其表达.方法 为防止细胞固定及通透使胞膜被破坏,在未经固定和通透的活体细胞上利用PS1抗体,通过间接免疫荧光法观察了内源性PS1在活细胞膜外表面的定位和表达；利用分子标签技术,构建GFP-PS1融合蛋白,瞬时转染细胞,检测到外源性PS1在细胞核膜的定位及在胞质中的少量分布；同时利用PS1抗体,将细胞固定及通透,用间接免疫荧光技术,检测到内源性PS1在细胞核膜中的定位及在细胞质中的少量不均匀分布.结果 内源性PS1在定位于亚细胞结构的膜同时,也定位于细胞外膜.结论 成功地在活体细胞外膜上检测到内源性PS1.
关键词： 早老素1基因 绿色荧光蛋白(GFP) 活体细胞 定位 -
PS1基因真核表达载体的构建与鉴定
目的 构建PS1基因真核表达载体,为PS1基因功能研究提供工具.方法 从C57BL/6小鼠不同胚胎中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应扩增PS1基因编码区,将其克隆入pMD18-T载体中.通过聚合酶链反应,酶切和DNA测序鉴定.结果 PS1在9日龄小鼠胚胎的cDNA中高表达.测序显示融合基因GFP-PS1和PS1-GFP中PS1为全长PS1编码序列.Western blot检测显示融合蛋白GFP-PS1与PS1-GFP的相对分子质量均为77 kD左右.结论 成功地构建了PS1基因真核表达载体.
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晚发阿尔茨海默病与早老素1基因及载脂蛋白E基因的关联分析
目的对中国汉族人群中早老素1(presenilin 1, PS1)基因8号内含子多态性与晚发阿尔茨海默病(AD)进行关联分析,探讨PS1与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性有无相互作用.方法应用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态性方法,检测了103例晚发AD患者和98例正常老年人中PS1与ApoE基因多态性,并对AD与PS1和ApoE各等位基因及基因型进行了关联分析.结果①在晚发AD患者中,PS1等位基因1和1/1基因型频率显著升高(Z=2.09,2.80,P＜0.05),而等位基因2的频率显著降低(Z=2.09,P＜0.05).②晚发AD患者与PS1等位基因1呈正相关(RR=1.58,χ2=5.11,P＜0.05),与PS1等位基因2呈负相关(RR=0.63,χ2=5.11,P＜0.05);晚发AD患者与PS 1/1基因型呈正相关(RR=2.43,χ2=7.57,P＜0.01),与1/2及2/2基因型无明显关联.③晚发AD与ApoE ε3/ε4基因型和等位基因ε4呈正相关(RR=2.95,χ2=8.18;RR=3.13,χ2=13.0,P均小于0.01).结论中国南方汉族人群中PS1和ApoE基因多态性与晚发AD之间有密切相关性.
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早发家族性阿尔茨海默病早老素1基因突变的研究
目的 探讨中国人早发型家族性阿尔茨海默病早老素1基因(presenilin 1,PSEN1的突变情况.方法 对1个早发型家族性阿尔茨海默病家系中的17名成员(包括5例患者)、10例散发型阿尔茨海默病患者和100名家系外非患病个体的PSEN1的第1～13外显子进行测序.结果 该家系中的6位成员PSEN1第11外显子1133位点G→A突变(Gly378Glu),其中5位已发病,1位成员基因突变未达发病阶段.散发型阿尔茨海默病、家族中超过发病年龄的正常人均未发现同样的突变.结论 PSEN1基因突变可能与早发性家族性阿尔茨海默病有关,而该基因第11外显子的1133位点G→A突变(Gly378Glu)是中国人家族性阿尔茨海默病的1个新的突变位点.
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早老素1基因多态性与Alzheimer病的相关研究
目的 探讨中国人群中早老素1(PS1)基因多态性与Alzheimer病(AD)的相关情况.方法 应用聚合酶链式反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)方法,观察了58例早发性AD患者、65例迟发AD患者、157名正常人中的PS1多态性分布,并对AD与PS1基因的各等位基因和基因型进行关联分析.结果 (1)早发AD患者中,PS1基因2/2型频率显著降低(P＜0.05);等位基因1频率显著升高,等位基因2频率显著降低(P＜0.05).迟发AD患者与正常对照之间不存在PS1等位基因和基因型分布的差异.(2)早发AD与PS1等位基因1正关联(RR＝2.29,P＜0.05),与等位基因2(RR＝0.44)和2/2基因型负关联(RR＝0.23,P＜0.05);迟发AD与PS1各等位基因及等位基因型之间无明显关联.(3)ApoE ε4型、早发性及女性AD患者与PS1基因的相关性尤为显著.结论 中国人群中PS1基因多态性可能仅与早发AD之间具有关联,而与迟发AD无关;这种关联具有年龄、性别差别.
关键词： 早老素1基因 多态现象(遗传学) Alzheimer病 关联
