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RNA干扰联合阻断MMS2和REV3基因表达减轻结肠癌细胞系THC8307/L-OHP对奥沙利铂的耐药性
目的 探讨沉默REV3和MMS2逆转结肠癌耐药细胞系THC8307/L-OHP细胞对奥沙利铂(L-OHP)的耐药性.方法 THC8307/L-OHP细胞转染含microRNA片段重组质粒后,用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)和免疫荧光法检测目的基因表达,选择低表达效率具有统计学意义的细胞作为实验组细胞.分别应用MTT法、罗丹明123实验、流式细胞术检测细胞对L-OHP药物敏感度和细胞凋亡.结果 与对照组相比,L-OHP对实验组细胞的半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(Rl)减低(P＜0.05),实验组细胞经L-OHP处理后凋亡率显著增高(P＜0.05),实验组细胞MMS2和REV3蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 下调REV3和MMS2在逆转人结肠癌细胞对L-OHP的耐药性和促进肿瘤细胞的凋亡上有一定作用.
关键词： RNA干扰 MMS2 REV3 THC8307/L-OHP细胞 细胞凋亡 -
DNA聚合酶ζ亚基REV3基因多态性与卵巢癌对铂类药物化疗敏感性的关系
目的 探讨DNA聚合酶ζ亚基REV3基因单核苷酸多态性(SNPs)与卵巢癌对铂类药物化疗敏感性的关系.方法 收集本院2013年1月至2016年12月接受含铂类化疗方案112例卵巢癌患者的外周静脉血,根据小等位基因频率 MAF>O.1和连锁不平衡参数 r2>0.8的原则筛选 REV3基因的6个 TagSNPs(rs181294、rs240966、rs4945880、rs465646、 rs3218573和rs462779),采用MassARRAY-IPLEX技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱平台(MALDI-TOF-MS)进行 REV3基因SNPs位点的基因分型,同时收集同期121例健康体检者的外周血作对照.采用Hardy-Weinberg平衡分析遗传平衡情况,比较两组以上SNPs位点的基因型和等位基因的分布差异并计算比值比(OR)来评价卵巢癌易感性;根据化疗效果将卵巢癌患者分为化疗敏感组和不敏感组,进一步分析REV3基因SNPS与卵巢癌对铂类药物化疗敏感性的关系.结果 112例卵巢癌患者和121例健康体检者REV3的6个TagSNPs均处于Hardy-Weinberg平衡状态.REV3 rs240966、rs4945880和 rs3218573基因型及等位基因分布在卵巢癌组与对照组中的差异无统计学意义且与卵巢癌易感性无关(P>0.05).卵巢癌组中携带REV3 rs181294、rs465646和rs462779小等位基因频率分别为40.6％、46.0％和49.6％,均高于对照组的27.7％、和37.2％(P<0.05),且卵巢癌的发病风险分别升高至1.787、2.419和1.659倍.112例卵巢癌患者均可评价疗效,其中敏感59例,不敏感53例.进一步分析发现rs240966、rs4945880、rs3218573及rs462779基因型和等位基因分布与卵巢癌对铂类药物化疗敏感性无关,而与rs181294、rs465646基因型和等位基因分布有关,其中携带rs181294 A等位基因或rs465646 G等位基因者的含铂方案不敏感发生风险升高(P<0.05).结论 REV3 rs181294、rs465646与卵巢癌易感性及含铂方案敏感性有关,其中携带rsl81294 A或rs465646 G的人群卵巢癌易感性及含铂耐药的发生风险升高,为卵巢癌易感人群的筛查有一定价值.
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SYBR Green实时定量PCR检测人原发脑胶质瘤中REV3和REV7基因的表达
目的 运用实时定量PCR检测跨损伤修复基因REV3和REV7在人脑原发脑胶质瘤组织中的表达水平,探讨其和肿瘤级别之间的关系.方法 采用SYBR Green实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测跨损伤修复基因REV3和REV7的mRNA在85例原发胶质瘤(Ⅱ级20例、Ⅲ级20例和Ⅳ级45例)和14例正常脑组织中的表达水平,统计学分析表达水平和肿瘤级别之间的关系.结果 与正常组织相比,REV3和REV7在各病理级别胶质瘤中均表达上调(P＜0.05);并且REV3在Ⅳ级胶质瘤中的表达比在Ⅱ级和Ⅲ级中都要高(P＜0.05).秩相关分析表明:REV3的表达量与胶质瘤病理分级呈正相关性(r=0.454,P＜0.001).结论 REV3和REV7在胶质瘤组织中均高表达,而且REV3表达水平和恶性程度有密切联系.
