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RNA干扰联合阻断MMS2和REV3基因表达减轻结肠癌细胞系THC8307/L-OHP对奥沙利铂的耐药性
目的 探讨沉默REV3和MMS2逆转结肠癌耐药细胞系THC8307/L-OHP细胞对奥沙利铂(L-OHP)的耐药性.方法 THC8307/L-OHP细胞转染含microRNA片段重组质粒后,用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)和免疫荧光法检测目的基因表达,选择低表达效率具有统计学意义的细胞作为实验组细胞.分别应用MTT法、罗丹明123实验、流式细胞术检测细胞对L-OHP药物敏感度和细胞凋亡.结果 与对照组相比,L-OHP对实验组细胞的半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(Rl)减低(P＜0.05),实验组细胞经L-OHP处理后凋亡率显著增高(P＜0.05),实验组细胞MMS2和REV3蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 下调REV3和MMS2在逆转人结肠癌细胞对L-OHP的耐药性和促进肿瘤细胞的凋亡上有一定作用.
关键词： RNA干扰 MMS2 REV3 THC8307/L-OHP细胞 细胞凋亡 -
MMS2和P53基因对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响
目的：探讨MMS2 siRNA与P53 siRNA对人高分化结肠癌细胞（ THC-8307）的增殖与凋亡的相互调控作用。方法：以实时定量聚合酶链反应（ qRT-PCR）、蛋白印迹法（ Western blot ）分析检测细胞转染效率，选择沉默效率具有统计学意义的THC-8307细胞作为实验组，同时将未作处理的THC-8307作为空白对照，转染空质粒细胞作为阴性对照。采用qRT-PCR及Western blot分别检测干扰各组目的基因后其两基因相互关系及表达量。采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率，以明确其对结肠癌细胞增殖与凋亡的作用。结果：实验组与对照组相比，分别沉默MMS2基因与P53基因的结肠癌细胞内P53与MMS2的mRNA与蛋白水平显著升高（ P＜0.05）。沉默MMS2实验组其早期凋亡与晚期凋亡率增加（ P＜0.05）。结论：MMS2和P53在结肠癌细胞增殖与凋亡方面起反向调控作用。
