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FK506对NIT-1细胞增殖和胰岛素分泌的影响
目的 探讨他克莫司(FK506)对NOD鼠胰岛β细胞系(NIT-1)增殖、凋亡和胰岛素分泌的影响.方法 用MTT法、流式细胞术检测NIT-1细胞增殖;放射免疫法、real-time PCR检测NIT-1细胞胰岛素分泌和胰岛素分化相关基因PDX-1、GLUT2和GK mRNA的表达.结果 FK506(20 μg/L)抑制NIT-1细胞增殖(P＜0.05),诱导细胞凋亡(P＜0.05);FK506(10 μg/L)抑制NIT-1细胞释放胰岛素(P＜0.05),胰岛素分泌相关基因PDX-1(胰岛素促进因子-1)、GLUT2(葡萄糖转运载体2)mRNA表达下调(P＜0.05).结论 FK506(10 μg/L)可抑制NIT-1的增殖,诱导凋亡,可通过下调PDX-1和GLUT2 mRNA表达,抑制NIT-1胰岛素分泌.
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化毒补虚方含药血清对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的实验研究
目的：观察不同浓度、不同时间化毒补虚方诱导肺腺癌细胞A549的抑制增殖作用及促进凋亡作用。方法：应用四氮唑蓝比色法（ MTT法）检测化毒补虚方对人肺腺癌细胞增殖的影响，同时筛选出起有效抑制作用的浓度；并应用倒置显微镜观察细胞形态的变化及荧光显微镜、透射电子显微镜（T EM ）观察细胞超微结构的变化。结果：M T T实验显示化毒补虚方抑制肺腺癌细胞增殖，其中50％浓度含药血清组对A549细胞抑制作用明显，在48 h达作用高峰；观察细胞形态及超微结构发现A549细胞形态发生明显改变，并可见凋亡小体。结论：化毒补虚方通过杀伤肺腺癌细胞、诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。
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舒林酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响及机制探讨
目的：以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象，利用不同浓度舒林酸处理PANC-1细胞，观察其对PANC-1细胞增殖、凋亡影响，并探讨舒林酸通过抑制Wnt/β-catenin信号通路杀伤PANC-1细胞的可能机制。方法实验分为阴性对照组（加入不含舒林酸的DMSO）和实验组（分别加入舒林酸浓度为0.25、0.5、1、1.5、2 mM的培养液，分别为：阴性对照组、0.25 mM组、0.5 mM组、1.0 mM组、1.5 mM组、2.0 mM组，总计6组）。MTT法检测PANC-1细胞生长抑制率；流式细胞术检测细胞凋亡率；RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞内β-Catenin的表达。结果 MTT结果显示：PANC-1细胞经舒林酸干预后生长均受到不同程度抑制，且随着舒林酸浓度增加，抑制作用越强。流式细胞术检测凋亡结果显示PANC-1细胞早期凋亡率干预后均有不同程度增加，与对照组相比，0.5、1.0 mM组早期凋亡率差异无统计学意义，而1.5、2.0 mM组差异均有统计学意义（P＜0.05）。RT-PCR结果显示可见各组β-catenin mRNA表达量随着舒林酸浓度增加而降低，0.5、1.0 mM组与对照组相比差异无统计学意义，而1.5及2.0 mM组差异有统计学意义（P＜0.05）；应用2.0 mM的舒林酸处理PANC-1细胞0、12、24、48、72 h，随着处理时间延长，β-catenin mRNA表达量逐渐降低，各处理组与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。ICC结果证实干预后PANC-1细胞内β-catenin表达量及核聚集降低，与对照组相比，0.25、0.5 mM组差异无统计学意义，而1.0、1.5、2.0 mM组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论舒林酸对PANC-1细胞具有生长抑制及促凋亡作用，这种作用具有浓度-时间依赖性，舒林酸抑制Wnt/β-catenin信号通路可能是其杀伤PANC-1细胞的可能机制之一。
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重组人内皮抑素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响
目的 初步研究Wnt通路在重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,ES)诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡过程中的作用及可能机制.方法 分别以50、100、200、400 μg/ml ES体外处理人肝癌细胞株SMMC-7721,利用MTT比色法检测不同浓度、时间ES作用下的细胞增殖状态；利用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡；Western blot检测β连环蛋白(β-catenin)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)表达；应用RT-PCR检测Wnt信号通路下游基因survivin及cyclin D1 mRNA表达情况.结果 不同浓度的ES对人肝癌细胞SMMC-7721具有不同程度的生长抑制作用,且存在时间剂量效应,ES作用48 h和72 h后,SMCC-7721细胞抑制率分别为(10.45±0.73)％和(21.81±0.55)％(50 μg/ml)；(15.42±1.91)％和(27.81±0.92)％(100μg/ml)；(23.64±0.43)％和(31.07±0.13)％(200 μg/ml)；(28.88±0.63)％和(43.76±0.55)％(400μg/ml).与24h各浓度组相比差异有统计学意义(P =0.000).各浓度ES处理后,SMMC-7721细胞G1期细胞比例与对照组比较差异有统计学意义(P=0.00)；SMMC-7721细胞经ES作用72 h后,随ES浓度升高,细胞凋亡率增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).ES能显著降低细胞β-catenin蛋白表达(P=0.000),但对GSK-3β蛋白表达无明显影响.ES能下调Wnt信号通路下游转录因子survivin及cyclin D1 mRNA水平.结论 ES通过促进β-catenin蛋白降解,降低Wnt信号通路下游癌基因survivin及cyclin D1 mRNA的转录,从而抑制SMMC-7721细胞增殖,并诱导细胞凋亡.ES抑制增殖、诱导凋亡的作用与GSK-3β蛋白表达无关.
