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PI3K/Akt信号通路及内质网应激在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的作用
目的 观察磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路及葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、生长停滞及DNA损伤基因(CHOP/GADD153)在四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化中的表达并探讨其可能的作用. 方法 将30只SD大鼠随机分为正常组、肝纤维化模型(皮下注射40% CCl4橄榄油溶液)4及8周组.HE染色法观察肝组织病理形态学;用real-time PCR技术检测肝脏内GRP78及CHOP mRNA的表达;用Western blot检测肝脏内PI3K/Akt信号通路中Akt1、磷酸化Akt1及内质网应激相关蛋白GRP78及CHOP的表达;用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝脏内GRP78及CHOP mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05),而肝脏内Akt1和磷酸化Akt1蛋白的表达则较正常大鼠显著降低(P<0.05);与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝细胞凋亡显著升高(P<0.05). 结论 PI3K/Akt信号通路及内质网应激可能在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中发挥了重要作用.
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内质网应激在乙酰化低密度脂蛋白引起的人单核巨噬细胞凋亡中的作用
目的 观察在脂质引起佛波酯(PMA)促分化后人单核细胞源性巨噬细胞(THP-1)凋亡中有无内质网(ER)应激,探讨巨噬细胞凋亡在慢性肾脏疾病并发加速进展的动脉粥样硬化和心血管事件中的作用.方法 密度梯度法提取低密度脂蛋白,制备乙酰化低密度脂蛋白(ACLDL).Hoechst染色定量计数凋亡细胞比例.easpase3,7活性测定检测凋亡.油红O染色观察细胞内脂滴变化.酶学反应法测定细胞内游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量.Western印迹和实时定量PCR测定细胞乙酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)、生长停滞及DNA损伤基因(CHOP)和Bcl-2的表达.结果 ACLDL呈剂量依赖和时间依赖促进细胞凋亡.100 mg/L ACLDL与THP-1巨噬细胞作用24 h,油红O染色下细胞内脂滴显著增多,细胞内FC和CE含量显著增加(P＜0.01).Western印迹显示,ACLDL 100 mg/L作用3～24 h,ACAT1、CHOP表达较作用前持续升高,Bcl-2表达持续降低.实时定量PCR显示,ACLDL作用12～24 h,较作用前促进CHOP mRNA表达(P＜0.01),抑制Bcl-2 mRNA表达(P＜0.01);ACLDL作用24 h点,较无ACLDL作用组促进CHOP mRNA表达(P＜0.01),抑制Bcl-2mRNA表达(P＜0.01),但对ACAT1表达没有影响.结论 在ACLDL引起的THP-1巨噬细胞凋亡中存在ER应激.
