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MiRNA-103的研究进展
微小RNA(miRNAs)是一类长度为22 nt左右的高度保守的内源性小分子非编码RNA,通过与靶基因的3'-UTR结合,对靶基因进行切割或翻译抑制.miR-103作为microRNA家族中重要的一员,不仅在子宫内膜癌、卵巢癌、白血病、胰腺癌、膀胱癌等多种肿瘤中发挥调控作用,且在糖脂代谢、无脑畸形的发病等方面有着潜在的作用.
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miR-103与胃癌多药耐药作用机制探讨
目的 既往研究肿瘤耐药均集中在DNA水平,而DNA又影响mRNA及蛋白质表达.但是mRNA与编码蛋白质的表达并不成比例,而非编码RNA恰好能解释两者之间的不平衡.非编码RNA即微小RNA(microRNA,miRNA),是一类内源性短链非编码小分子核糖核苷酸,长度约18~25个核糖核苷酸,是转录后基因表达调节的关键分子,参与胃癌的发生发展.本研究旨在探讨miR-103在胃癌多药耐药中作用及其分子机制.方法 miRNA芯片筛选SGC7901/ADR及SGC7901细胞差异表达miRNA,应用qRT-PCR验证miR-103表达;将miR-103的拟似物及抑制物分别转染SGC7901/ADR及SGC7901细胞,MTT法检测转染前后对多柔比星敏感性变化;蛋白质印迹法检测miR-103对caveolin-1表达的影响.结果 miR-103在SGC7901/ADR细胞中表达(0.32±0.04)显著低于SGC7901细胞.miR-103拟似物转染SGC7901/ADR细胞后对多柔比星的敏感性较对照组显著提高,IC50由(18.83±0.32) μg/mL下降到(4.54±0.29) μg/mL,t=1.04,P<0.05;而miR-103抑制物转染SGC7901细胞后对多柔比星的敏感性显著降低,IC50由(1.65±0.03) μg/mL上升到(15.27±0.26) μg/mL,t=1.25,P<0.05.miR-103靶向作用于caveolin-1的3''-UTR,并在转录后水平负向调控caveolin-1表达.结论 miR-103通过靶向负调控caveolin-1表达,增加SGC7901/ADR细胞对多柔比星敏感性,从而逆转胃癌多药耐药.
关键词： 胃癌 多药耐药 miR-103 Caveolin-1 -
MicroRNA-590-5p、microRNA-103、microRNA-34c-5p、Dicer及BRMS-1基因在肺癌中的表达研究
目的 探讨microRNA-590-5p(miR-590-5p)、miR-103、miR-34c-5p、Dicer及BRMS-1在肺癌中表达及相互间关系.方法 选取47例肺癌患者的癌组织及癌旁正常组织,利用Trizol提取总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应检测基因的相对表达量.结果 肺癌组织与癌旁正常组织miR-103、miR-34c-5p、Dicer及BRMS-1基因表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),miR-34c-5p与P53呈正相关(P<0.05), miR-103与多药耐药相关蛋白呈正相关(P<0.05),Dicer与miR-34c-5p、miR-103及miR-590-5p呈负相关(P<0.05).结论 在肺癌组织中Dicer基因表达与miR-34c-5p呈负相关,可能通过抑制癌基因的表达,抑制肺癌的发生.
关键词： 肺癌 miR-590-5P miR-103 miR-34c-5p Dicer -
miR-103通过抑制FBW7的表达促进肝癌细胞增殖
[目的]研究miR-103对肝癌细胞增殖功能的影响及其作用机制.[方法]Real time PCR方法检测miR-103在肝癌组织和细胞中的表达.将miR-103 inhibitor转染到肝癌细胞中,分为实验组(转染miR-103 inhibitor)和对照组(转染Negative Control),通过MTT实验检测肝癌细胞的增殖变化.Real time PCR和Western blotting检测转染miR-103 mimics后肝癌细胞中FBW7 mRNA和蛋白的表达变化.通过重荧光素酶报告基因实验检测转染miR-103 mimics或inhibitor后FBW7-3'UTR活性的变化.[结果]Real time PCR结果显示miR-103在肝癌组织和HepG2细胞系中均高于癌旁组织和L02肝细胞系(P＜0.05).MTT实验结果显示,转染miR-103 inhibitor实验组肝癌细胞的存活细胞数低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Real time PCR和Western blotting结果显示,转染miR-103 mimics实验组肝癌细胞中FBW7的mRNA和蛋白表达水平都低于对照组.重荧光素酶报告基因实验结果显示,与对照组相比,转染miR-103 mimics的实验组中FBW7-3' UTR报告基因活性显著降低(P＜0.05);与对照组相比,转染miR-103 inhibitor的实验组中FBW7-3' UTR活性显著升高(P＜0.05).进一步实验发现,转染FBW7后能显著下调由miR-103 mimics所引起的细胞增殖作用.[结论]miR-103可以通过抑制FBW7的表达来促进肝癌细胞增殖.
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六味地黄丸对妊娠期糖尿病胰岛素抵抗的miR-103调控机制研究
目的:探讨六味地黄丸对妊娠期糖尿病(GDM)胰岛素抵抗的miR-103调控机制.方法:随机数字表法将60只雌性大鼠分为对照组、GDM模型组、六味地黄丸低剂量组、六味地黄丸高剂量组,每组各15只,比较四组血糖水平、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用实时定量PCR技术(qRT-PCR)、荧光定量PCR、蛋白质印迹法(Western blot)等方法检测四组miR-103、小窝结构(Caveolae1)-胰岛素受体底物(IRS)-磷酸化蛋白激酶B(pAkt)信号通路相关基因和蛋白表达水平.结果:六味地黄丸高剂量组FBG、INS、HOMA-IR和miR-103表达水平较GDM模型组和六味地黄丸低剂量组明显低,差异显著(P＜0.05);六味地黄丸高剂量组Caveolae1、IRS、pAkt相关基因表达水平和其蛋白表达活性较GDM模型组和六味地黄丸低剂量组明显高,差异显著(P＜0.05);六味地黄丸高剂量组上述各项指标与对照组相比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:六味地黄丸对GDM临床疗效明确,作用机制可能与其有效下调miR-103水平,从而抑制miR-103调控靶基因Caveolae1、IRS和pAkt有关.
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miR-103通过抑制MED26的表达促进小细胞肺癌细胞的增殖
目的:研究miR-103对小细胞肺癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法:Real-time PCR法检测miR-103在人小细胞肺癌组织和细胞中的表达.将miR-103 inhibitor转染到人小细胞肺癌细胞中,通过CCK8实验检测小细胞肺癌细胞的增殖活性.Real-time PCR和Western blotting检测转染miR-103 inhibitor后小细胞肺癌细胞中MED26 mRNA和蛋白的表达变化.通过双萤光素酶报告基因验证miR-103与MED26的作用机制.结果:miR-103在小细胞肺癌组织和人小细胞肺癌细胞系NCI-H1688中的表达均高于癌旁组织和对照细胞系.转染miR-103 inhibitor后小细胞肺癌细胞的增殖活性显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Real-time PCR和Western blotting结果显示,转染miR-103 inhibitor后小细胞肺癌细胞中MED26的mRNA表达水平高于对照组.双萤光素酶报告基因实验结果显示,与对照组相比,转染miR-103 mimics的实验组中MED26 3’-UTR报告基因活性显著降低(P＜0.05).转染MED26后能显著抑制小细胞肺癌细胞增殖活性.结论:miR-103可以通过抑制MED26的表达来促进小细胞肺癌细胞的增殖.
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血清miR-103和Dicer1表达及在结直肠癌中的诊断价值
目的:探讨结直肠癌患者血清miR-103和Dicer1表达情况,分析miR-103联合Dicer1检测在结直肠癌诊断中的应用前景.方法:72例经病理确诊的结直肠癌患者为实验组,72例健康体检者为对照组.应用实时定量PCR法检测实验组和对照组血清miR-103和Dicer1表达水平.分析两种生物标志物联合诊断结直肠癌的价值.结果:与对照组相比,miR-103在实验组患者血清中表达水平显著上调(P＜0.01),Dicer1水平显著下调(P＜0.05).miR-103表达水平与结直肠癌临床分期、肿瘤转移情况以及Dicer1水平密切相关(P均＜0.05).miR-103与Dicer1联合在结直肠癌检测的敏感度和特异度高可达82.1％和95.6％,Lo-gistic分析受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积(AUC)为0.754.结论:miR-103高表达与结直肠癌分期、转移及Dicer1表达关系密切,与Dicer1联合有望成为结直肠癌的早期诊断指标.
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蓝光对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响和机制研究
目的:研究蓝光对人视网膜色素上皮细胞增殖能力的影响,并初步探讨其可能机制.方法:利用35W白色冷光灯加用蓝色滤光片建立蓝光损伤体外培养的RPE细胞模型,蓝光控制波长在470~520nm,光照强度控制为2000Lx左右,光照时间控制为24~96h,利用CCK-8法检测RPE细胞的增殖能力,利用real-time PCR技术检测RPE细胞中miR-103的含量.结果:与对照组相比,蓝光照射组的RPE细胞的增殖能力减弱;蓝光照射组的RPE细胞内的miR-103含量较对照组增加;miR-103过表达时,RPE细胞的增殖能力减退,降低miR-103的表达时,细胞增殖能力增强;降低miR-103的表达能够减弱蓝光对RPE细胞增殖的抑制作用.结论:蓝光通过上调miR-103抑制RPE细胞的增殖,miR-103可能成为治疗年龄相关性黄斑变性等视网膜变性疾病治疗的新靶点.
关键词： 蓝光 人视网膜色素上皮细胞 增殖 miR-103
