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胚胎皮层神经元的发育及其相关分子机制
在胚胎皮层的发育过程中,神经元及胶质细胞先后由同一先祖细胞分化而来.其中,bHLH(basic helix-loop-helix)转录因子NGN1表达水平的改变可能是前体细胞从神经元发生到胶质细胞发生转变过程中的一个关键因素.此外,转录因子EMX2 、PAX6 、MASH1等也与神经元的表型特化及皮层的区域划分密切相关.
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组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7促进Ngn1基因的表达
目的 构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响.方法 采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK 293T细胞,Western blot验证其表达;利用实时荧光定量PCR技术检测在神经分化模型(全反式维甲酸诱导P19神经分化)中,Setd7对神经分化关键基因Ngn1的调控;利用双荧光素酶报告系统检测Setd7对Ngn1启动子活性的影响;构建小鼠Setd7 siRNA干扰质粒,利用实时荧光定量PCR技术检测其抑制效果以及对 Ngn1 mRNA表达的影响.结果 成功构建了小鼠Setd7基因的真核表达载体,可在HEK 293T细胞中有效表达;Setd7可促进Ngn1 mRNA表达;Setd7能够促进Ngn1启动子活性; 降低Setd7抑制Ngn1 mRNA 表达.结论 组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7能够促进神经分化关键基因Ngn1的转录.
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从NSCs关键调控基因Neurogenin1初探益肾化浊方改善阿尔茨海默病模型大鼠海马区学习记忆能力的作用机制研究
[目的]观察益肾化浊方对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区Neurogenin1 (ngn1)基因、GFAP和Tubulin 蛋白表达的影响,初探益肾化浊方改善AD模型大鼠学习记忆能力的作用机制.[方法]雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、益肾化浊方低、中、高剂量组.治疗组给予益肾化浊方低、中、高剂量分别为2.8、5.6、11.2 g/kg,1次/日,共灌胃4周.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马区ngn1基因表达,蛋白质印迹法检测GFAP和Tubulin蛋白表达的变化.[结果]与假手术组比较,模型组大鼠海马区ngn1基因表达下降,GFAP蛋白表达增加,Tubulin蛋白表达显著下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,益肾化浊方低、中、高剂量组大鼠海马区ngn1基因表达升高,GFAP蛋白表达减少,Tubulin蛋白表达显著升高.[结论]益肾化浊方可能通过增加AD模型大鼠海马区ngn1基因表达,促进神经元再生,进而改善其学习记忆功能.
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火针调控脊髓损伤后神经干细胞Ngn1、CyclinD1基因表达的离体研究
目的:观察火针对脊髓损伤后神经干细胞Ngn1和CyclinD1基因的调控作用.方法:采用随机数字表法将60只大鼠随机分为空白组(5只)、假手术组(5只),剩余大鼠按照1天、3天、7天、10天、14天时间点随机分为模型组、火针组,每组5只;采用改良的Allen's法对模型组和火针组造模,相应时间点取大鼠腹主动脉血清置于神经干细胞培养皿中培养72 h,通过RT-PCR技术检测目的基因表达.结果:与假手术组比较,1天时模型组和火针组Ngn1基因表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);在7天、10天时火针组Ngn1基因表达量均明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05).与假手术组比较,1天时模型组和火针组CyclinD1基因表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);在3天、7天、10天时火针组CyclinD1基因表达量均明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:火针可调控脊髓损伤神经干细胞Ngn1和CyclinD1基因表达.
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Neurogenin1在肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓中的表达变化
目的:研究neurogenin 1 (Ngn1)转录因子在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内的表达变化,探讨其在ALS转基因鼠发病中的作用.方法:选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各18只,分别于95、108 d和122 d取材,部分鼠经4％多聚甲醛心灌注固定,分离脊髓、制备冷冻切片;部分鼠分离脊髓、提取蛋白和RNA,分别应用免疫荧光显色、免疫印迹和RT-PCR检测Ngnl蛋白及mRNA在ALS转基因鼠发病中的变化.结果:与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠Ngnl mRNA和蛋白表达在95、108 d和122 d均降低.免疫荧光实验结果显示,Ngnl阳性细胞主要分布在脊髓灰质前角,与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠Ngnl阳性细胞光密度值明显减小.结论:在ALS转基因鼠发病脊髓中Ngnl阳性细胞光密度值明显减少,mRNA和蛋白表达降低,表明Ngnl与ALS的发生密切相关.
关键词： 肌萎缩脊髓侧索硬化症 NGN1 神经退行性变 脊髓
