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益肾化浊方对SAMP8小鼠NEI网络相关指标的影响
目的：观察益肾化浊方对SAMP8小鼠神经-内分泌-免疫网络（NEI网络）相关指标水平的作用，为益肾化浊方防治老年性痴呆提供实验信息和科学依据。方法：根据月龄（6、9、12月）不同共选择90只健康雄性SMAP8小鼠，各月龄小鼠分别为30只，然后同一月龄随机分为安慰剂组、安理申组和益肾化浊方组，每组10只。分别给予安理申、益肾化浊方及生理盐水灌胃，每日1次，连续灌胃4周。4周后应用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中乙酰胆碱（Ach）、雌二醇、促肾上腺皮质激素（ACTH）和白细胞介素-2（IL-2）的含量。结果：1）相同月龄与安慰剂组相比，9、12月龄小鼠安理申组与益肾化浊方组对Ach水平均有上调作用，具有统计学意义（P＜0.05）。2）相同月龄与安慰剂组相比，9、12月龄小鼠益肾化浊方组对雌二醇和ACTH水平也有上调作用，对IL-2水平有下调作用，具有统计学意义（P＜0.05）。3）与安慰剂组相比，9月龄小鼠益肾化浊方组Ach、雌二醇、ACTH和IL-2均有变化（P≤0.001）；与安慰剂组相比，12月龄小鼠益肾化浊方组Ach、雌二醇、ACTH和IL-2均有变化（P＞0.001）。结论：益肾化浊方可通过整体多靶点调节NEI网络相关指标水平，达到治疗AD的目的。除此之外，早期防治对NEI网络稳态的恢复效果更明显。
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益肾化浊方对Aβ25-35介导神经干细胞增殖与分化的影响
目的:观察益肾化浊方对阿尔茨海默病(AD)脑中神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响,为益肾化浊方治疗AD提供实验依据.方法:分离孕14 d小鼠胚胎NSCs,并以β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)处理,分为空白组(正常培养基),模型组(5μmol·L-1Aβ25-35),Aβ25+益肾化浊方低剂量(0.1 mg·L-1)组,Aβ25-35+益肾化浊方中剂量(1 mg·L-1)组,Aβ25+益肾化浊方高剂量(10 mg·L-1)组,共5组,药物在Aβ25-35作用2h后加入,培养至48 h后,进行检测.采用WST法检测益肾化浊方对NSCs增殖的影响,免疫荧光法检测其对NSCs分化的影响.结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低,(GFAP+/DAPI)％比例上升,(Tubulin+/DAPl)％比例降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).与模型组相比,益肾化浊方各剂量组均可以提高Aβ25-35损伤NSCs活力,降低(GFAP +/DAPI)％比例,升高(Tubulin+/DAPI)％比例,差异具有统计学意义(P＜0.05),且均以低剂量组效果更为明显.结论:益肾化浊方可促进Aβ25-35介导的NSCs增殖,诱导其向神经元方向分化,抑制其向星形胶质细胞方向分化.
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从JAK2/STAT3信号通路探讨益肾化浊方含药脑脊液对神经干细胞增殖与分化的影响
目的:观察益肾化浊方含药脑脊液对神经干细胞(NSCs)增殖与分化的影响,并探讨其相关作用机制.方法:从孕14.5d的昆明小鼠分离培养NSCs,分为空白组,正常组,AG490(JAK/STAT通路抑制剂)组和益肾化浊方组.空白组为培养基本底,其余各组分别予10％的正常脑脊液、AG490和益肾化浊方含药脑脊液.采用CCK-8检测各组NSCs的增殖率,免疫荧光检测其分化情况,Western blot检测Tubulin、GFAP及JAK2/STAT3通路相关蛋白的表达情况.结果:CCK-8检测结果显示:与空白组比较,益肾化浊方组在24h和48h时OD值显著升高(P＜0.05),而72h时升高无统计学差异.免疫荧光和Western blot检测结果显示:与空白组比较,益肾化浊方组能显著增加Tubulin阳性细胞率及Tubulin蛋白的表达(P＜0.05),显著降低GFAP阳性细胞率和GFAP蛋白的表达(P＜0.05),且益肾化浊方组还可显著下调JAK2/STAT3通路中STAT3、p-STAT3、Smadl蛋白的表达(P＜0.05).结论:益肾化浊方含药脑脊液可促进NSCs的适度增殖,调控NSCs向神经元分化,抑制其向星形胶质细胞分化,该作用可能与抑制JAK2/STAT3通路相关.
关键词： JAK2/STAT3通路 益肾化浊方 脑脊液 神经干细胞 分化 -
从JAK/STAT信号转导通路探讨益肾化浊方对神经干细胞定向分化的影响
目的 探讨益肾化浊方治疗阿尔茨海默病的可能作用机制.方法 从孕14天昆明小鼠体外提取并培养神经干细胞,建立分化系统中可溶性Aβ25-35(5μmol/L)介导的具有神经毒性的阿尔茨海默病细胞模型.实验分为对照组(等量培养基)、模型组(5 μmol/L Aβ25-35 100μ1)和益肾化浊中药组(5 μ mol/LAβ25-35 100μl+0.1 μg/ml益肾化浊方100μ1).常规消化细胞,计数后以细胞密度每毫升2×105/个(每孔2ml)接种于6孔板,培养48 h.Western Blot法检测神经胶质酸性蛋白(GFAP)、微管蛋白(Tubulin)和转录激活子3 (STAT3)、磷酸化转录激活子3(P-STAT3)、Smad1蛋白表达;RT-PCR法检测GFAP、STAT3、Smad1、Tubulin基因的表达.结果 与对照组比较,模型组GFAP、STAT3基因及蛋白表达显著增加、P-STAT3蛋白表达显著增加,Tubulin基因及蛋白表达显著减少(P＜0.05),Smad1基因及蛋白表达增加不明显(P＞0.05);与模型组比较,益肾化浊中药组GFAP、STAT3、Smad1基因及蛋白表达均显著下降、P-STAT3蛋白表达亦下降,而Tubulin基因及蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 益肾化浊方可能通过调控JAK/STAT信号通路中相关蛋白及基因表达,从而抑制神经干细胞向星形胶质细胞方向分化来延缓阿尔茨海默病发展.
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益肾化浊方对SAMP8小鼠学习记忆能力及海马神经元突触关键蛋白CREB的影响
目的 观察益肾化浊方对SAMP8小鼠学习记忆能力及海马神经元突触关键蛋白环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的影响. 方法 取30只12月龄快速老化小鼠(SAMP8),随机分为SAMP8组、盐酸多奈哌齐组及益肾化浊方组,另取10只正常老化小鼠(SAMR1)作为对照组.其中SAMR1组及SAMP8组不干预,益肾化浊方组给予益肾化浊方生药9.62 mg/kg,盐酸多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐0.01 mg/g,通过Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力;通过电镜观察各组小鼠海马神经元突触微观形态学变化;采用Western blot法检测各组小鼠海马组织CREB蛋白的表达.结果 在定位航行实验中,SAMP8组小鼠的潜伏时间与游泳总路程比SAMR1组明显延长(P＜0.05),与SAMP8组小鼠比较,益肾化浊方组小鼠潜伏时间与游泳总路程明显缩短(P＜0.05);空间探索实验中,与SAMR1组比较,SAMP8组小鼠穿越目标象限次数与t/t总明显减少(P＜0.05),益肾化浊方组穿越目标象限次数和t/t总较SAMP8组显著增加(P＜0.05),而盐酸多奈哌齐组穿越目标象限次数较SAMP8组显著增加(P＜0.05).电镜下SAMR1组小鼠海马神经元突触间隙清晰,突触前线粒体嵴和膜完整,突触小泡数量正常,大小均一.而SAMP8组突触间隙完全融合、模糊不清,突触前重度水肿,未见线粒体,突触小泡数量大量减少,大小不均一,益肾化浊方组突触间隙少部分融合,突触前水肿程度减轻,对于突触损伤的缓解程度优于盐酸多奈哌齐组.与SAMR1组比较,SAMP8组小鼠海马组织CREB表达明显减少(P＜0.05),益肾化浊方组与盐酸多奈哌齐组可上调CREB的表达(P＜0.05). 结论 益肾化浊方可明显改善SAMP8小鼠学习记忆能力,可能与上调海马组织内CREB蛋白的表达,保护海马神经元突触微观形态,进而改善神经元突触功能有关.
关键词： 益肾化浊方 SAMP8鼠 神经元 突触 环磷腺苷效应元件结合蛋白 -
从NSCs关键调控基因Neurogenin1初探益肾化浊方改善阿尔茨海默病模型大鼠海马区学习记忆能力的作用机制研究
[目的]观察益肾化浊方对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区Neurogenin1 (ngn1)基因、GFAP和Tubulin 蛋白表达的影响,初探益肾化浊方改善AD模型大鼠学习记忆能力的作用机制.[方法]雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、益肾化浊方低、中、高剂量组.治疗组给予益肾化浊方低、中、高剂量分别为2.8、5.6、11.2 g/kg,1次/日,共灌胃4周.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马区ngn1基因表达,蛋白质印迹法检测GFAP和Tubulin蛋白表达的变化.[结果]与假手术组比较,模型组大鼠海马区ngn1基因表达下降,GFAP蛋白表达增加,Tubulin蛋白表达显著下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,益肾化浊方低、中、高剂量组大鼠海马区ngn1基因表达升高,GFAP蛋白表达减少,Tubulin蛋白表达显著升高.[结论]益肾化浊方可能通过增加AD模型大鼠海马区ngn1基因表达,促进神经元再生,进而改善其学习记忆功能.
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益肾化浊方对快速老化小鼠认知功能与海马神经元形态学的影响及机制
目的 探讨益肾化浊方对阿尔兹海默病模型快速老化鼠(SAMP)8空间记忆能力、海马神经元形态学的影响及其作用机制.方法 将48只9月龄健康雄性SMAP8采用双盲法随机分为SAMP8组、安理申组、益肾化浊方组,每组16只,另取16只SAMR1作为对照组.各组小鼠分别灌胃给予安理申(30 mg/kg)、益肾化浊方(20g/kg)或等体积0.9％生理盐水,2次/d,连续14 w.分别采用Morris水迷宫检测空间学习记忆能力,尼氏染色观察细胞凋亡情况,电镜观察神经元超微结构,RT-PCR、Western印迹检测β-淀粉样蛋白前体(APP)、早老蛋白(PS1)基因和GSK-3β蛋白表达.结果 与对照组比较,SAMP8组游泳总路程、逃避潜伏时间、海马CA1区神经元凋亡数目和APP、PS1基因及GSK-3β蛋白表达量均显著增加(P＜0.01),穿越平台次数显著减少(P＜0.01),游泳速度显著降低(P＜0.01),超微结构损伤明显;与SAMP8组比较,安理申组与益肾化浊方组游泳总路程明显缩短(P＜0.01),穿越平台次数明显增加(P＜0.01),游泳速度亦显著加快(P＜0.01),同时显著减轻神经元超微结构损伤;此外,安理申可显著下调GSK-3β蛋白表达(P＜0.01),益肾化浊方可显著减少神经元凋亡数目(P＜0.01),同时下调APP、PS1基因表达(P＜0.01);组别和训练天数对逃避潜伏时间、总路程、穿越平台次数有明显影响(P＜0.01).结论 益肾化浊方可有效提高SAMP8的空间记忆能力,抗神经元凋亡并保护神经元超微结构,其作用机制可能与下调APP、PS1基因和GSK-3β蛋白的表达相关.
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益肾化浊方对阿尔茨海默病大鼠Bcl－2／Bax及α分泌酶蛋白可溶性淀粉酶前体蛋白α表达的影响
目的：探讨益肾化浊方对阿尔茨海默病（ AD）模型大鼠可溶性淀粉酶前体蛋白α（ sAPPα）、α分泌酶蛋白以及 Bcl－2／Bax比值的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾化浊方组，每组10只。益肾化浊方组灌以中药，假手术组与模型组大鼠灌胃等体积生理盐水，1次／d，共4 w。治疗后取海马标本并采用Western印迹检测大鼠海马中sAPPα、α分泌酶以及Bcl－2／Bax比值的表达。结果与假手术组比较，模型组sAPPα、α分泌酶蛋白、Bcl－2／Bax比值表达明显降低（ P＜0．05）；与模型组相比，益肾化浊方组sAPPα、α分泌酶蛋白、Bcl－2／Bax比值明显升高（P＜0．05）。结论益肾化浊方可通过促进Bcl－2表达、抑制Bax表达提高Bcl－2B／ax 比值，上调AD模型大鼠海马中sAPP α、α分泌酶蛋白，发挥抑制神经细胞凋亡、抑制Aβ的神经毒性作用。
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临床研究">"益肾化浊方"治疗轻度阿尔茨海默病15例临床研究
目的:观察益肾化浊方治疗轻度阿尔茨海默病肾虚证患者的临床疗效.方法:治疗组15 例给予益肾化浊免煎颗粒口服,对照组15 例给予盐酸多奈哌齐片.分别于治疗前、治疗24 周及停药后24 周进行疗效评价.结果:治疗组在中医症状疗效方面较对照组有显著性差异,在MMSE、ADL 评分方面与对照组比较无统计学意义,但认知功能、日常生活能力总有效率高于对照组,但无统计学意义.结论:益肾化浊方对轻度阿尔茨海默病(肾虚证)患者中医症状方面的改善有显著作用,对认知功能及日常生活能力方面的改善有一定作用.
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益肾化浊方对阿尔茨海默病模型大鼠海马区C82+浓度及钙相关记忆蛋白表达的影响
目的 观察益肾化浊方对AD模型大鼠海马区Ca2浓度及钙相关记忆蛋白表达的影响,初步探讨益肾化浊方治疗AD的部分作用机制.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组和益肾化浊方组.采用右侧侧脑室注射Aβ25-35建立AD模型,造模成功后益肾化浊方组大鼠按照4.32g·kg-1·d-1剂量给予药液灌胃,假手术组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃,持续4周.采用Rhod 2-AM荧光探针法和Western blot检测各组大鼠海马区突触Ca2+浓度及CaMKⅡ、NR2B、CREB、BDNF和TrkB蛋白的表达.结果 (1)Rhod 2-AM荧光探针法检测结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠钙离子浓度显著升高(P＜0.01);与模型组相比,益肾化浊方组钙离子浓度显著减低(P＜0.01),差异具有统计学意义.(2)Western blot检测结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠海马区NR2B、CaMKⅡ、CREB、BDNF和TrkB蛋白的表达显著降低(P＜0.01);与模型组比较,益肾化浊方组NR2B、CaMKⅡ、CREB、BDNF和TrkB蛋白显著升高(P＜0.01),差异具有统计学意义.结论 益肾化浊方治疗AD的作用机制可能与调节海马突触体内Ca2+浓度,减轻Aβ诱发的神经毒性;同时增加钙相关记忆蛋白的表达有关.
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益肾化浊方条件培养基对神经干细胞增殖分化影响的研究
目的 从JAK/STAT信号转导通路,探讨益肾化浊通过微环境调控神经干细胞(NSCs)增殖与分化,为益肾化浊方治疗AD提供部分实验依据.方法 分离提取孕14 d昆明小鼠胚胎NSCs,以5μmol·L-1β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)干预建立AD细胞模型,并以不同浓度益肾化浊方共培养48h后,分别收集各组细胞培养基,使用基础培养基稀释成10％浓度条件培养基,培养正常神经干细胞,分为空白对照组,正常条培组,Aβ条培组,复方0.1 μg·ml-1条培组,复方1μg·ml-条培组,复方10μg·ml-1条培组,共6组.采用CCK-8法检测益肾化浊方条件培养基对NSCs增殖与细胞活性的影响,免疫荧光法与Western Blot法检测其对NSCs分化的影响;Western Blot与PCR法检测JAK/STAT信号转导通路关键靶点蛋白与基因表达的变化.结果 与Aβ条培组相比,益肾化浊方条件培养基可促进NSCs增殖,提高其细胞活性;同时可促进NSCs向神经元分化,抑制其向星形胶质细胞分化,差异具有统计学意义(P＜0.05).复方0.1 μg·ml-1条培组均可明显降低STAT3、P-STAT3、Smad1、GFAP蛋白表达,下调GFAP、STAT3、Smad1基因同时上调ngn1基因表达,促进NSCs向神经元分化,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 益肾化浊方条件培养基可通过调控JAK/STAT信号转导通路,提高NSCs活性,促进神经元分化,延缓AD进展.
关键词： 阿尔茨海默病 益肾化浊方 条件培养基 微环境 JAK/STAT信号转导通路
