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甲基汞对大鼠脑突触体谷氨酸摄取的抑制作用
应用高亲和性摄取试验研究了甲基汞在体外对大鼠脑突触体谷氨酸摄取的影响.结果表明,1×10-9～1×10-4mol/L甲基汞可使大鼠大脑皮层、海马、纹状体和小脑突触体3H-L-谷氨酸摄取量分别下降0.7%～74.4%、7.5%～91.1%、1.4%～76.6%和4.4%～77.0%,其中在1×10-6～1×10-4mol/L范围内均有显著性意义(P<0.05),且均存在明显的剂量-效应关系,其抑制作用的IC50分别为7.9、3.6、2.2和4.3×10-6mol/L.本研究结果提示甲基汞可明显抑制大鼠脑突触体高亲和谷氨酸摄取功能.
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安神定志灵对大鼠脑内突触体多巴胺合成相关因子表达的影响
目的:研究安神定志灵对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH),多巴脱羧酶(DOPA decarboxylase,DDC),蛋白激酶A (protein kinase A,PKA)的调控作用,揭示安神定志灵治疗注意缺陷多动障碍(ADHD)的药效机制.方法:依据随机数字将自发性高血压(SHR)大鼠分为模型组,利他林组,安神定志灵低、中、高剂量(6.75,13.35,26.70 g·kg-1)组,每组8只,另设WKY大鼠8只为正常组,分别灌胃4周.Percoll密度梯度离心法制备脑突触体,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TH,PKA蛋白表达;运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Read-time PCR)技术检测TH,DDC,PKA mRNA表达水平,运用免疫荧光技术检测TH,DDC阳性细胞表达量.结果:与正常组比较,模型组大鼠突触体内TH,DDC,PKA表达量显著降低(P＜0.01);与模型组比较,利他林组及安神定志灵中剂量组突触体内TH,PKA蛋白及TH,PKA,DDC mRNA表达量及阳性细胞数均有所升高(P＜0.05);免疫组化阳性细胞计数显示,与正常组比较,模型组及安神定志灵高剂量组TH阳性细胞表达显著降低(P＜0.01),安神定志灵低剂量组TH阳性细胞表达明显降低(P＜0.05);模型组及安神定志灵低剂量组中DDC阳性细胞表达显著降低(P＜0.01);治疗后与模型组比较,利他林组及安神定志灵低、中剂量组TH阳性细胞表达显著上升(P＜0.01),利他林组及安神定志灵中、高剂量组DDC阳性细胞数上升显著(P＜0.01).结论:安神定志灵通过调控TH,DDC,PKA的表达,影响多巴胺的合成速度,安神定志灵控制ADHD核心症状的作用可能与调控多巴胺合成速度有关.
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愈痫灵对戊四氮点燃癫痫大鼠钙离子的干预作用
据流行病学调查资料显示:全世界有超过5‰的人口患有癫痫(epilepsy)[1],给家庭、社会带来沉重的心理压力和巨大的经济负担.愈痫灵颗粒是以活血化瘀药物为主所组成的方剂,临床疗效满意[2],并已证实对致痫大鼠颞叶及海马病理学损害有预保护作用[3],为了进一步说明其临床疗效,本实验通过观察该方对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫大鼠海马突触体[Ca2+]i、脑脊液和血清[Ca2+]i的影响,探讨其抗癫痫的作用机制.
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聪圣胶囊对小鼠脑缺血损伤后细胞内游离钙含量的影响
目的:研究聪圣胶囊对小鼠脑缺血再灌注后脑组织突触体及拟缺血损伤神经细胞内[Ca2+]i的影响,分析聪圣胶囊抗脑缺血损伤的作用机制.方法:采用Fura-2/AM双波长荧光分光光度法,检测小鼠脑组织突触体和胎鼠神经细胞悬液内[Ca2+]i.结果:聪圣胶囊3g/kg和9g/kg灌胃给药可减轻小鼠脑缺血再灌注后突触体内钙超载程度;聪圣胶囊含药血清可抑制低糖低氧1h及高浓度(200μmol/L)谷氨酸引起的神经细胞内钙的升高.结论:聪圣胶囊可通过减轻脑缺血损伤后钙超载程度来发挥抗脑缺血作用.
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大鼠脊髓突触体中生理活性物质分析
目的 分析测定大鼠脊髓突触体中生理活性物质氨基酸神经递质、ATP、Ca2+等.方法 不连续性Percoll密度梯度离心法从Sprague-Dawley雌性大鼠中提取脊髓突触体.采用高效液相色谱仪检测其中氨基酸神经递质,紫外分光光度计检测ATP含量、Na+-K+-ATP酶活性、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性、总ATP酶活性,荧光分光光度计检测Ca2+浓度.结果 氨基酸神经递质主要为天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、γ-氨基丁酸;ATP浓度约414.7461μmol/mg,总ATP酶活性>Na+-K+-ATP酶活性>Ca2+-Mg2+-ATP酶活性;Ca2+浓度可用吸光度值直接换算.结论 大鼠脊髓突触体中含有多种生理活性物质,以上方法能准确地进行检测分析,了解其生理活性.
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大鼠衰老过程中脊髓外周型苯二氮卓受体的变化
目的 探讨大鼠衰老过程中脊髓突触体外周型苯二氮卓受体(PBRs)的变化以及与血小板膜PBRs的相关性. 方法 实验动物SD大鼠(雌雄各半)分为3月龄青年组和24月龄老龄组.动物断头处死后,迅速取脊髓.采用梯度离心技术制备脊髓突触体,低渗溶血法制备外周血血小板膜.应用放射配基[3H]PK11195结合实验测定PBRs结合活力. 结果 各组动物雄性、雌性间比较,脊髓突触体、外周血血小板膜PBRs结合活性差异均无显著意义(P＞0.05).3月龄和24月龄脊髓突触体[3H]PK11195结合活性分别为(213.94±10.65)和(50.65±2.74) fmol/mg pro.(t=51.418,P＜0.001),外周血血小板膜[3H]PK11195结合活性分别为(104.97±2.24)和(56.20±5.36) fmol/mg pro.(t=29.041,P＜0.001).与青年组比较,老龄组大脊髓突触体及血小板膜[3H]PK11195结合活性分别下降了76.33％、46.46％.血小板膜[3H]PK11195结合活性与脊髓突触体[3H]PK11195结合活性间具有显著相关性(r=0.985,P＜0.001). 结论 脊髓突触体PBRs水平呈增龄下降改变,血小板膜[3H]PK11195结合活性能够反映脊髓组织该指标的变化.
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新生儿缺氧缺血性脑病发病机理研究进展
兴奋性氨基酸(excitatory amino acid, EAA)是人类脑组织中的主要神经递质,在中枢神经系统发育中起着重要作用.EAA参于中枢神经系统发育的不同生理过程,如发育、形成树状结构和突触体、学习、记忆等.中枢神经系统正常发育需要理想的EAA水平,EAA过多可致神经损伤和死亡,活性低下,延迟或中断发育[1].近年来不少研究表明,细胞外EAA浓度过高及各氨酸(glutamic acid, Glu)受体调节紊乱是脑缺氧缺血损伤的主要原因[2,3].本文就EAA及受体在缺氧缺血性脑病(HIE)中的作用,一氧化氮(nitric oxide, NO)、腺苷与EAA的兴奋毒性,抑制性氨基酸(inhibitory amino acid, IAA)与EAA之间的关系作如下综述.
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突触体维系蛋白-25基因与注意缺陷多动障碍的关系
目的 探讨突触体维系蛋白-25(SNAP-25)基因3'端未翻译区T1065G和T1069C多态性位点与注意缺陷多动障碍(ADHD)的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测138例ADHD患者(患者组)和119名对照者(对照组)基因型和等位基因频率.结果 (1)患者组与对照组SNAP-25基因T1065G多态性基因型及等位基因频率的总体分布差异有统计学意义(P＜0.05),其中患者组1065T/1065T基因型(70.3%)和1065T等位基因频率(84.1%)高于对照组(分别为56.3%和74.4%;P＜0.05);患者组1065G/1065G基因型频率(2.2%)略低于对照组(7.6%),但差异无统计学意义(P=0.07).(2)SNAP-25基因T1069C多态性,两组均为1069T等位基因(100%,100%),均未发现1069C等位基因.结论 SNAP-25基因T1065G多态性与ADHD可能存在关联,1065T/1065T基因型和1065T等位基因可能是ADHD发病的危险因素.
关键词： 注意力缺陷障碍伴多动 突触体 基因 多态性 限制性片段长度 -
大鼠急性感染性脑水肿的脑保护作用研究
目的探讨百日咳菌液诱导的急性感染性脑水肿的发生机制和类型,并观察尼莫地平和MK-801的作用.方法测定脑组织水分含量和EB含量,Fura-2/AM测定突触体[Ca2+]i,放射性配基结合法测定NMDA受体的结合量.结果 [Ca2+]i随脑水肿时间的延长而持续进行性升高,伴随脑组织水分含量和EB含量增加.MK-801预处理和尼莫地平治疗后,脑组织含水量和EB含量及[Ca2+]i明显下降(P＜0.05).PB组与NS组相比Kd值有显著性差异,而Bmax差异无显著性.结论感染性脑水肿是混合性脑水肿,它的发生与Ca2+通道开放和NMDA受体介导的迟发性钙离子内流及BBB通透性增加密切相关.MK-801和尼莫地平通过缓解细胞内钙离子超载和改善BBB的通透性,从而减轻脑水肿.
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神经生长因子改善衰老性记忆障碍及突触机制的探讨
目的探讨神经生长因子(NGF)改善衰老性记忆障碍的机制.方法采用开场行为和一次性被动回避反应模型,观察海马内微量注射NGF对衰老小鼠自发活动和记忆巩固过程的影响, 同时用Ca2+荧光探针Fura-2/AM和AR-CM-MIC阳离子测定系统测定海马突触体游离钙水平,以3H-Leu为标记物测定海马突触体总蛋白的合成量.结果 NGF使衰老小鼠在新异环境中的自发活动和探究行为明显增多,并显著延长电击后24 h的步入潜伏期(STL); NGF显著降低衰老小鼠海马突触体内的高钙水平,并使海马突触体蛋白质的3H-Leu参入量显著增加.结论 NGF改善衰老性记忆障碍与其降低海马突触体内高钙水平,并由此促进海马突触体蛋白质的合成有关.
关键词： 神经生长因子(NGF) 记忆 突触体 3H-Leu参入 -
果糖二磷酸钠镁对缺血突触体游离钙浓度及一氧化氮合酶活性的影响
目的研究果糖二磷酸钠镁对缺血突触体游离钙浓度及一氧化氮合酶活性的影响,以探讨其保护脑缺血的作用机制.方法以相分离法制备正常大鼠脑突触体,氧糖剥夺培养建立缺血突触体模型,加入1.3 mmol*L-1 SMFD,4.0 mmol*L-1 FDP与之培养60 min后,测定突触体内游离钙浓度和一氧化氮合酶活性.结果 1.3 mmol*L-1 SMFD可明显降低缺血突触体内游离钙浓度,降低一氧化氮合酶活性,其作用强于4.0 mmol*L-1 FDP.结论 SMFD保护脑缺血的作用机制可能与其阻止脑缺血后细胞内钙超载,抑制一氧化氮合酶活性有关.
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4-氨基吡啶对牛磺酸调节突触体氨基酸释放的影响
牛磺酸(taurine, Tau)是中枢神经系统中丰富的氨基酸(AA)之一，其作用与GABA类似也是一种神经调质，能调节突触体AA的释放［1］。4-氨基吡啶(4-aminopyridine, 4-AP)是一种非选择性K+通道的阻滞剂，导致钙通道的开放,诱发神经末梢释放神经递质［2］,尼莫地平(Nim)是一种Ca2+通道的拮抗剂，它们能否影响牛磺酸调节突触体AA的释放，尚未见报道。本文以4-AP和Nim为工具药，探讨牛磺酸调节突触体AA释放的机理。
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神经肌肉接头前阻断剂川楝素抑制大鼠大脑皮层突触体谷氨酸释放
目的阐释川楝素的作用机制,为了解递质解释的基本过程提供线索.方法以大鼠大脑皮层匀浆经密度梯度离心分离获得的突触体作为研究标本,分别施加50 mmol·L-1 KCl,1.5μmol·L-1卡西霉素或7.5mmlo·L-14-氨基吡啶触发谷氨酸（Glu）释放。通过检测由Glu氧化脱氢反应与NAD+生成的NADH荧光变化测定Glu释放量.结果川楝素浓度、时间依赖地显著摄制由KCl诱发的Glu释放，并主要抑制钙依赖性释放；由卡西霉素直接提升胞内钙离子浓度而诱发的Glu释放也被川楝素明显抑制。结论川楝素抑制中枢突触Glu释放，该效应与其导致的递质释放机制中钙离子敏感性降低有关.
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地佐环平对缺血突触体氨基酸释放和游离钙的影响
目的初步探讨地佐环平(MK-801)对脑缺血的保护作用与兴奋性氨基酸(EAA)和抑制性氨基酸(IAA)释放的关系.方法营养液中去除糖和氧,建立大鼠脑突触体缺血模型,检测静息及高钾去极化状态下,缺血突触体EAA和IAA释放量及游离钙浓度.结果大鼠突触体缺血状态致天冬氨酸和甘氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸释放量明显增加,而谷氨酸亦有增加趋势.缺血+50 mmol*L-1 K+刺激后,上述EAA及IAA释放量均进一步增加.静息及去极化状态下的缺血突触体游离钙浓度显著增加.MK-801 0.1 mmol*L-1可显著阻遏静息及去极化状态缺血突触体释放EAA及IAA,但对EAA的抑制作用更明显;同时亦明显降低两种状态下缺血突触体内游离钙浓度.结论 MK-801的抗脑缺血致脑损伤作用,至少部分与其对抗缺血引起的突触体内游离钙浓度升高和EAA释放量增加的作用有关.
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4种临床常见选择性5-羟色胺再摄取抑制剂对5-羟色胺转运体的抑制作用比较
目的 选择性5.羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂(selective serotonin reuptake inhibitors,SSRIs)是目前临床应用广泛的新型抗抑郁药物.通过考察氟西汀、帕罗西汀、西酞普兰和舍曲林对5-HT转运体(serotonin transporter,SERT)的抑制作用的强弱,为临床选择药物提供实验依据.方法 利用大鼠脑突触体和大鼠血小板SERT,通过放射配基实验,观察在SSRIs存在下SERT对[3H]5-HT的摄取变化,获得IC50值,比较氟西汀、帕罗西汀、西酞普兰和舍曲林对SERT抑制作用的强弱.结果 大鼠脑组织突触体和血小板SERT体外放射配基结合实验显示,帕罗西汀、氟西汀、西酞普兰和舍曲林对SERT抑制作用的IC50(nmol·L-1)分别为(血小板vs突触体):(1.26 vs 1.39)、(44.7 vs 35.5)、(10.5 vs 16.2)和(6.64 vs 7.09).结论 4种SSRIs对SERT的抑制作用都很强,IC50在nmol·L-1数量级.抑制作用的强弱依次为帕罗西汀＞舍曲林＞西酞普兰＞氟西汀.
关键词： 选择性5-羟色胺再摄取抑制剂 5-羟色胺转运体 放射配基结合实验 突触体 血小板 -
D-半乳糖致衰老大鼠脑海马外周型苯二氮(艹卓)受体改变及其与认知行为的相关研究
目的观察海马突触体外周型苯二氮革受体(PBR)水平对大鼠空间学习和记忆能力的影响.方法SD大鼠随机分为对照组和D-半乳糖组.D-半乳糖组动物连续皮下注射D-半乳糖(100mg/kg,每日1次)56次,对照组注射生理盐水.利用Morris水迷宫测试动物学习记忆能力后制备海马突触体,测定PBR大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(KD).结果与对照组比较,D-半乳糖组动物学习记忆能力降低(P＜0.001),KD无显著变化.D-半乳糖组Bmax(177.2 fmol/mg±26.7fmol/mg)低于对照组(296.7 fmol/mg±33.5 fmol/mg)(P＜0.001),海马突触体[3H]PK11195特异性结合活性与迷宫试验动物逃避潜伏期(r=-0.854)、平台象限游泳时间(r=0.845)及距离(r=0.851)显著相关(P＜0.001).结论海马突触体PBR表达量可能与大鼠空间学习和记忆有关.
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微波辐射对大鼠海马突触结构和功能的影响
目的 探讨微波辐射对大鼠海马突触结构、突触体特性以及神经递质含量和释放的影响.方法 采用30 mW/cm2微波辐射Wistar大鼠,通过电镜观察辐射后6 h海马突触结构改变,并对突触体进行鉴定;采用流式细胞仪和电子自旋共振仪检测辐射后突触体内Ca2+浓度和膜蛋白流动性的改变;于辐射后6 h及1、3、7 d采用高效液相色谱仪和分光光度法检测辐射后海马氨基酸和乙酰胆碱递质含量以及突触体释放的变化.结果 30 mW/cm2微波辐射可引起海马突触囊泡堆积、活性区延长、突触后致密物增加、突触穿孔以及突触曲率增加.突触体内Ca2+浓度升高,与假辐射组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),膜蛋白旋转相关时间(τc)缩短,与假辐射组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).海马谷氨酸和甘氨酸含量降低,突触体γ-氨基丁酸(GABA)释放减少;乙酰胆碱含量,乙酰胆碱酯酶(AChE)活力以及乙酰胆碱释放均增加,与假辐射组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 微波辐射可引起海马突触结构和功能损伤,进而可能影响学习记忆功能.
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延迟低温复合巴曲酶对沙土鼠全脑缺血后脑神经细胞突触体ATP酶活力的影响
ATP酶对于维持哺乳动物脑神经细胞兴奋性、传导性,调节神经递质的代谢等方面发挥着重要的作用[1].脑缺血后神经细胞突触体ATP酶活力降低,严重影响神经细胞的功能状态,可以导致神经坏死[2].
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异氟醚麻醉对老龄大鼠海马突触体蛋白质组的影响
目的 评价异氟醚麻醉对老龄大鼠海马突触体蛋白质组的影响.方法 雌性SD大鼠27只,22月龄,体重480～550 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组:对照组(C组,n=6)和异氟醚麻醉组(Ⅰ组,n=21).C组吸入含80％氧气的空氧混合气体2h,Ⅰ组吸入3％异氟醚麻醉诱导后,经口明视气管插管,吸入2％异氟醚+80％氧气维持麻醉2h.麻醉结束后24h时,进行Y型迷宫实验测试大鼠认知功能,记录训练次数.以训练次数＞ 75次为判断认知功能低下的标准,将Ⅰ组大鼠分为2组:认知功能低下组(IA组)和认知功能未低下组(IB组).Y型迷宫实验结束后,处死大鼠,取双侧海马组织,提取突触体,进行双向凝胶电泳和质谱分析.结果 Ⅰ组有6只大鼠发生认知功能低下,有13只大鼠未发生认知功能低下.与C组和IB组比较,IA组训练次数增多(P＜0.05)；C组和IB组间比较训练次数差异无统计学意义(P＞0.05).IB组和IA组差异表达的蛋白质有21个,其中11个蛋白质表达上调,10个蛋白质表达下调.C组和IA组差异表达的蛋白质有19个,其中12个蛋白质表达上调,7个蛋白质表达下调.经质谱分析鉴定出31个蛋白质.结论 异氟醚麻醉导致老龄大鼠认知功能低下可能与突触部位能量代谢相关蛋白、突触部位的细胞骨架结构及调节蛋白的改变有关.
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GABAA受体介导硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸释放的抑制作用
目的观察硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸释放的影响以及γ-氨基丁酸受体(GABAA)在其中的作用.方法 SD大鼠断头取脑,分离前额皮层,加入到冰冷蔗糖溶液中进行匀浆,在0℃～4℃下以1 000 g离心5 min,取上清液再以12 000 g离心20 min,所得沉淀为粗突触体,用人工脑脊液孵育.分为5组:对照组(C组)、硫喷妥钠10 μmol/L组(THS10组)、硫喷妥钠30 μmol/L组(THS30组)、硫喷妥钠100 μmol/L组(THS100组)、硫喷妥钠300 μmol/L组(THS300组),每组含8份突触体.向各组人工脑脊液中分别加入10～300 μmol/L不同浓度的硫喷妥钠(C组中不加入),于37℃水浴中自发释放或应用30 mmol/L KCl诱发释放谷氨酸,应用高效液相色谱法测定反应液中谷氨酸含量,于水浴前向人工脑脊液中加入0.1 mmol/L的荷包牡丹碱,观察其对硫喷妥钠影响谷氨酸释放的作用.结果硫喷妥钠30、100、300 μmol/L可明显抑制谷氨酸的自发释放(P＜0.01)及KCl诱发的谷氨酸释放(P均＜0.01),THS10、THS30、THS100三组之间差异有显著性(P＜0.01),但THS100与THS300两组之间差异无显著性(P＞0.05).0.1 mmol/L荷包牡丹碱本身对突触体自发释放和KCl诱发释放谷氨酸无明显影响,但硫喷妥钠各浓度组中加入荷包牡丹碱后,谷氨酸释放水平与C组比较差异无显著性(P＞0.05).结论硫喷妥钠可浓度依赖性地抑制大鼠前额皮层突触体自发释放及高浓度KCl诱发释放谷氨酸,这种效应是由GABAA受体介导的.
