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腺嘌呤致大鼠雄性不育发病机理的实验研究
目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)超家族的细胞内信号转导分子Smad 2、Smad 4蛋白在腺嘌呤所致雄性不育的大鼠睾丸内定位、分布及作用机制.方法应用免疫组织化学SABC法检测正常成年及腺嘌呤(300mg/kg)灌胃后第7、14、21 d大鼠睾丸中Smad 2、Smad 4的定位和分布,并通过图像分析系统进行统计学分析,同时应用放射免疫法测定血清中睾酮(T)、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的含量.结果Smad 2免疫阳性产物位于实验大鼠各级生精细胞及支持细胞的胞质内,Samd 4则位于间质细胞的胞质内;灌胃后第21 d大鼠睾丸中Smad2、Smad 4表达明显高于正常成年及7、14 d大鼠,同时,血清中T较正常成年及7、14 d大鼠明显降低,LH、FSH明显增高.结论腺嘌呤所致雄性不育可能与Smad 2在大鼠睾丸生精细胞中表达增强及Smad 4在睾丸间质细胞中表达增强,直接或间接影响睾丸的生精功能有关.
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Smad 2和Smad 4蛋白在成年大鼠睾丸的表达
目的探讨转化生长因子-β超家族肽类的细胞内信号转导分子Smad 2和Smad 4蛋白在成年大鼠睾丸的表达及在精子发生中的作用机理. 方法用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵增强技术,检测成年大鼠睾丸Smad 2和Smad 4蛋白的表达和定位. 结果 Smad 2蛋白主要表达在大鼠睾丸生精小管的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞中,免疫反应物质主要定位于细胞质 ,胞核为阴性;而Smad 4蛋白则主要表达于间质细胞的胞质中,支持细胞呈弱阳性染色. 结论 Smad 2蛋白主要表达于睾丸生精小管各级生精细胞,Smad 4蛋白表达于间质细胞,为揭示TGF-β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据.
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17-β-雌二醇对人肝细胞癌细胞MHCC97H侵袭转移的作用及其机制
目的 观察17-β-雌二醇对人MHCC97H肝癌细胞侵袭转移的作用,探讨其相应机制. 方法 用不同浓度17-β-雌二醇(0,0.1,1,10 μmol/L)干预MHCC97H肝癌细胞24h.Transwell小室法检测17-β-雌二醇干预后MHCC97H肝癌细胞侵袭能力的改变.利用real-time PCR和Western blot法检测17-β-雌二醇干预对MHCC97H肝癌细胞中E-cadherin和Vimen-tin RNA和蛋白表达水平的改变.Western blot检测17-β-雌二醇对MHCC97H细胞中Smad2和p-Smad2蛋白表达水平的影响. 结果 17-β-雌二醇能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞的侵袭能力,随着浓度的升高抑制能力逐渐增强(P＜0.05).当浓度超过0.1 μmol/L时,17-β-雌二醇能够有效抑提高MHCC97H肝癌细胞中E-cadherin的转录和蛋白表达,并同时抑制细胞中Vimentin蛋白的表达(P＜0.05);当浓度超过0.2 μmol/L时,17-β-雌二醇能够有效抑制Vimentin的转录(P＜0.05).进一步的检测发现当浓度超过0.1 μnol/L时,17-β-雌二醇能够有效抑制MHCC97H细胞中Smad2的磷酸化水平(P＜0.05). 结论 17-β-雌二醇能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞的侵袭,这种作用可能与其通过抑制Smad2的磷酸化进一步调节E-cadherin和Vimentin的表达有关.
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人牙胚发育过程中Smad 2分子的表达与分布变化
目的观察转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)特异的细胞内信号转导分子Smad 2在人牙胚发育过程中的表达与分布变化,探讨Smad 2在牙发育过程中的作用.方法制备人牙胚发育各期标本,免疫组化方法检测Smad 2分子的表达.结果 Smad 2在牙胚发育的各个时期存在特异的时空分布模式,其分布与TGF-β有相似之处.结论首次观察到Smad 2信号分子在人牙胚发育过程中的表达,Smad 2作为TGF-β细胞内信号分子,可能参与上皮-间充质的信号诱导,同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化以及牙釉质和牙本质的形成.
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非小细胞肺癌TGF-β1、TRFⅡ及Smad 2的表达及其临床病理学意义
目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)、转化生长因子受体Ⅱ(TRFⅡ)及Smad蛋白2(Smad 2)在非小细胞肺癌中的表达特征与临床病理学因素的关系.方法应用免疫组织化学技术分析56例非小细胞肺癌手术切除标本中TGF-β1、TRFⅡ及Smad 2的分布特征,并分析不同临床病理学因素下的表达特征.结果非小细胞肺癌TGF-β1、TRFⅡ及Smad2的表达与肺癌的TNM分期、组织类型、淋巴管侵袭、淋巴结转移、肿瘤区微血管数量、肿瘤区微血管类型、肿瘤间质反应、神经纤维周围间隙侵袭有关,而与年龄、性别、肿瘤大直径、淋巴组织反应、远处转移等无关.结论非小细胞肺癌TGF-β1、TRFⅡ及Smad 2的表达与临床病理学因素的分析对于判断其局部生物学行为、复发及预后具有重要意义.
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低强度脉冲超声对牙本质损伤修复过程中TGF-β1/Smads表达的作用
目的:观察低强度脉冲超声(low intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对牙本质牙髓复合体损伤修复模型中TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法:25只Sprague-Dawley大鼠随机选择5只大鼠作为空白对照组,不予任何处理.剩余20只于双侧上颌第一磨牙采用改良备洞法备洞,建立牙本质牙髓损伤修复模型,右侧为LIPUS组,予以LIPUS辐照(强度为30 mW/cm2,频率为1.5 MHz,调制信号波宽为200 μs,重复率为1 kHz,20 min/d);左侧为备洞组,予以超声假照处理.分别在辐照1,3,5,7,14 d后处死大鼠,运用免疫组织化学法及图像分析技术检测TGF-β1,Smad 2和3在牙髓组织中的动态表达和定位情况.结果:TGF-β1,Smad 2,3蛋白在正常牙髓组织中均呈弱阳性表达,而在牙本质损伤后出现不同程度的表达增加.备洞组TGF-β1蛋白表达在1d时增加,在5d时TGF-β1表达强,在14 d时表达减弱接近正常水平;与备洞组相比,LIPUS组在3和5d时表达明显升高(均P＜0.05).Smad 2,3在LIPUS组及备洞组牙髓中表达均呈现逐步升高的基本变化,其中LIPUS组升高更明显(P＜0.05).结论:TGF-β1/Smad 2,3信号通路可能参与了牙本质损伤的修复过程,LIPUS在牙本质损伤修复早期可上调TGF-β1,Smad 2,3的表达,可能参与并促进了牙本质牙髓复合体的损伤修复过程.
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基于Smads信号通路探讨止消通脉宁干预TGF-β1诱导HK-2细胞转分化的研究
目的:探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响.方法:将HK-2 细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL +10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL +10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL +10%高剂量止消通脉宁含药血清).药物干预24小时后,荧光定量PCR检测TβRI、TβRⅡ的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达.结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRI、TβRⅡ 的mRNA表达和Smad 2、Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P＜0.05).而空白血清无此作用.结论:止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用.
