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大鼠胚胎神经干细胞与永生化神经干细胞系C17.2定向分化为神经元潜能的差异
目的 对比大鼠早期胚胎神经干细胞( NSCs)与永生化神经干细胞系C17.2(C17.2-NSC)定向分化为神经元潜能的差异,确立适用于诱导NSCs定向分化为神经元高内涵药物筛选的NSCs筛选模型. 方法 C17.2-NSC、17d胚胎海马NSCs(E17-NSC)及11d胚胎大脑皮层NSCs(E11-NSC)均设定对照组和实验组,对照组与实验组的细胞在含有2％ (v/v) B27的DMEM/F12培养液中,分别经0μmol/L和1μmol/L维甲酸(RA)在37℃、5％CO2常规培养条件下诱导分化5d,通过免疫组织化学技术检测对照组与实验组中NSCs或前体细胞特异性标志蛋白巢蛋白(Nestin)及神经元特异性标志蛋白βⅢ微管蛋白(Tuj1)表达量的差异. 结果 与对照组相比,C17.2-NSC经1μμmol/L RA诱导后未定向分化为神经元,而E17-NSC及E11-NSC经1μmol/L RA诱导后可有效定向分化为神经元. 结论 相对于C17.2-NSC,大鼠早期胚胎NSCs定向分化为神经元的潜能更强,适用于诱导NSCs定向分化为神经元的高内涵药物筛选.
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丹参注射液体外对神经干细胞分化细胞突起形成的影响
目的 探讨丹参注射液(Salvia Miltiorrhiza Injection,SMN)对SD大鼠来源的神经干细胞分化细胞神经突起发生的影响.方法 取1日龄大鼠神经干细胞原代培养后传代至第4代,经鉴定符合神经干细胞特征,然后加入不同浓度的SMN进行干预后,分别为SMN 10μg/ml、SMN 20μg/ml、SMN 50μg/ml对神经干细胞进行体外诱导.显微图像Olympus Cell Sens Dimension软件实时采集分析测定细胞图像,测量不同浓度丹参注射液对突起发生的影响;用免疫组织化学方法检测突起微管结构标志物βⅢ-tubulin微管蛋白的表达,采用Western blot法检测βⅢ-tubulin在神经突起中特异性蛋白的表达以及细胞外调节蛋白激酶ERK磷酸化程度.结果 SMN诱导后突起发生率随着浓度的增加而增加,呈现明显的浓度依赖性,较空白对照组分别增加3.6％(10μg/ml),18.5％(20μg/ml)和26.0％(50μg/ml),βⅢ-tubulin表达增加(P<0.05),调节蛋白激酶ERK磷酸化水平明显升高(P<0.05).结论 丹参注射液体外可以诱导神经干细胞来源的细胞突起发生,在突触建立过程中发挥重要作用,其作用机制可能与上调蛋白激酶ERK有关.
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二十二碳五烯酸对PC12细胞神经突起生长的诱导作用
目的探讨二十二碳五烯酸(docosapentenoic acid,DPA) 对PC12细胞神经突起生长的诱导作用.方法通过培养PC12细胞,利用Motic Zamges Plus软件测绘细胞图像,观察不同浓度DPA对神经突起形成的影响;Western blot法检测神经元突起标志物βⅢ-tubulin的表达及细胞外调节蛋白激酶 (ERK) 和蛋白激酶B (Akt) 磷酸化程度.结果P12细胞神经突起形成率在DPA的诱导下呈浓度依赖性增加,较对照组分别增加2.4%(DPA 10 μg/ml,P>0.05)、18.6%(DPA 30 μg/ml,P<0.05)和25.0%(DPA 50 μg/ml,P<0.05);DPA可促进βⅢ-tubulin的表达(P<0.05), 提高ERK与Akt 的磷酸化水平 (P<0.05).结论DPA促进PC12细胞神经细胞突起生长,其机制可能与激活ERK和Akt信号通路有关.
