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排斥性导向分子a抑制剂6FNⅢ对大鼠大脑皮质神经元缺血再灌注后自噬的作用
目的 探讨排斥性导向分子a(RGMa)特异性抑制剂6FNⅢ对大鼠大脑皮质神经元缺血再灌注引发的自噬及对神经功能恢复的影响.方法 雄性成年SD大鼠立体定位侧脑室注射不同浓度6FNⅢ后建立大脑中动脉闭塞(MCAO)/再灌注模型,Western blotting检测RGMa下游分子脑衰反应调节蛋白-2(CRMP-2)蛋白表达水平,确定佳6FNⅢ干预浓度.将72只雄性成年SD大鼠随机分成4组:假手术组(sham)、脑缺血再灌注组(I/R)、生理盐水干预组(I/R+ NS)、6FNⅢ干预组(I/R+ 6FNⅢ),每组18只.缺血2h再灌注后24h,采用神经功能缺损评分评估各组大鼠神经功能恢复情况;Western blotting检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ水平;免疫荧光双标检测LC3在神经元内的表达情况;透射电子显微镜观察自噬体的形成情况.结果 根据各浓度6FNⅢ干预组CRMP-2表达,确定中浓度(0.5 g/L)为本实验的适浓度.缺血再灌注后24h,I/R组较sham组神经功能评分降低(P＜0.05)、自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ水半升高(P＜0.05)、自噬体形成增多;I/R+ 6FNⅢ组较I/R组神经功能评分增高(P＜0.05)、自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ水平降低(P＜0.05)、自噬体形成减少;而I/R+ NS组与I/R组以上各项均无统计学意义(P＞0.05).结论 RGMa特异性抑制剂6FNⅡ可在缺血再灌注急性期抑制自噬发生,促进神经功能恢复.
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RNA干扰RGMa对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质血管再生的影响
目的 探讨RNA干扰排斥性导向分子a(repulsive guidance molecule a,RGMa)对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质血管再生的作用及其可能的机制.方法 大鼠随机分为假手术组(S组)、脑缺血再灌注损伤组(I/R组)、脑缺血再灌注损伤+ RGMa特异性RNA干扰重组腺病毒干预组(I/R+ rAd-shRGMa组)以及脑缺血再灌注损伤十空载体重组腺病毒注射组(I/R+rAd-HK组).大鼠在脑缺血前接受腺病毒注射,然后采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型.再灌注后2d免疫荧光双标法定位RGMa及其受体Neogenin在血管内皮细胞上的表达.腺病毒注射后7d,免疫组化标记CD31+的血管内皮细胞,计数大脑皮质缺血周围区微血管数;蛋白质印迹实验检测血管内皮生长因子a(VEGFa)蛋白表达水平;评估神经功能缺损.结果 在缺血再灌注损伤后,RGMa及其受体Neogenin在CD31+细胞上均有表达.RNA干扰抑制RGMa表达后,微血管数量增多,VEGFa蛋白表达水平升高,神经功能缺损减轻.结论 RNA干扰RGMa表达可促进缺血再灌注损伤后缺血皮质周围区血管再生,该过程可能与脑组织VEGFa表达水平上调有关.
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运动锻炼对局灶性脑缺血大鼠脑皮质RGMa表达的影响
目的:探讨运动锻炼对卒中后大鼠缺血侧脑皮质排斥性导向分子A(Repulsive guidance molecule A,RGMa)表达的影响.方法:选用SD大鼠120只,随机分为5组,正常组,假手术组,MCAo模型7、14、28 d组,以上各组再分为:非运动、低运动量、中动量、高动量锻炼组,每组6只.应用线栓法制备局灶性脑缺血/再灌注模型,用实时定量PCR和免疫组化方法检测缺血侧脑皮质RGMa的表达.结果:[1]实时定量PCR:低运动量模型各组与对应时间点非运动模型组比,RGMa相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05).中运动量模型各组与各对应时间点非运动模型组相比,前者表达量显著下降(P＜0.05),高运动量模型各组与对应时间点非运动模型组相比,RGMa相对表达量显著升高(P＜0.05).[2]免疫组化:低运动量模型各组与对应时间点各非运动模型组相比,RGMa表达差异无统计学意义(P＞0.05).中运动量模型各组与对应时间点各非运动模型组相比,前者RGMa表达明显下降(P＜0.05),但中运动量模型7 d组RGMa表达量与对应非运动模型组相比差异无统计学意义(P＞0.05),高运动量模型各组与对应时间点各非运动模型组相比,RGMa表达明显增加(P＜0.05).神经功能评分显示中运动量模型组明显改善神经功能(P＜0.05).结论:适量锻炼可以降低局灶性脑缺血大鼠患侧皮质RGMa的表达,改善神经功能.
