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紫杉醇诱导HepG2肝癌细胞凋亡中miR-224沉默凋亡抑制因子5基因的作用
目的 探讨紫杉醇诱导肝癌HepG2细胞凋亡时miRNA对基因的沉默的作用.方法 用不同浓度紫杉醇处理肝癌HepG2细胞后,流式细胞术检测其细胞凋亡;通过实时定量PCR(Real-time PCR)测定miR-224和凋亡抑制因子5(api-5)mRNA的表达;用免疫组织化学二步法和免疫印迹法(Western blotting)检测API-5蛋白的表达.结果 紫杉醇诱导HepG2细胞凋亡时,通过2-△△CT法分析发现,除了0.5mg/L、1 mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h miR-224不升反降外,其他浓度和处理时间miR-224表达均显示上调;0.5mg/L、1 mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h api-5 mRNA表达稍微降低,0.5mg/L紫杉醇处理48h无增长,其他浓度和处理时间api-5 mRNA表达均上调;应用IPP v 5.1图像分析软件处理,经t检验分析发现,紫杉醇处理后API-5蛋白表达均下调(P＜0.05).结论 上调的miR-224可能作用其靶基因api-5的表达,通过与api-5 mRNA的3'UTR结合阻止翻译的完成,从而对肝癌细胞的凋亡途径产生影响.
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初探紫杉醇诱导肝癌HepG2细胞凋亡中miR-224的表达
肝癌是一种常见病和多发病,可分为原发性和继发性两大类.前者起源于肝脏的上皮或间叶组织,称为原发性肝癌,在我国发病率高、危害大;后者称为肉瘤,较为少见;指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏而形成.紫杉醇是一种从红杉属植物紫杉的树皮和树干中提取的天然抗癌药物,在临床上用于多种肿瘤的治疗;有独特的结构和作用机制;可以阻抑细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡.细胞凋亡是受自身基因控制的、程序性的死亡,有体内和体外两个途径:死亡受体介导的外源途径和线粒体介导的内源途径.微小RNA是一类细胞中长度约为22个核苷酸的非编码小分子RNA,具有调控功能;主要参与基因转录后水平的调控.它们在细胞的增殖、死亡等过程中有重要的作用.miRNA基因的初级转录产物在核内和细胞质中分别经过两次切割产生成熟的miRNA,再与蛋白质一起组成RNA诱导沉默复合体,从而引起靶mRNA的降解或者抑制翻译.为了探讨紫杉醇诱导肝癌HepG2细胞凋亡时miRNA的作用,探讨其作用机制.用2,1,0.5 mg/L等不同浓度紫杉醇处理肝癌HepG2细胞后;通过Annexin-V和碘化丙碇双染;利用流式细胞术检测其细胞凋亡,通过实时定量PCR测定miR-224的表达.结果发现紫杉醇诱导HepG2细胞凋亡时,miR-224表达上调.上调的miR-224可能作用其靶基因,从而影响肝癌细胞的凋亡途径.
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微小RNA-224靶向Tribbles同源蛋白1调控前列腺癌细胞DU145的迁移和侵袭
目的 观察微小RNA-224 (miR-224)对前列腺癌细胞DU145迁移和侵袭能力的影响以及对靶基因Tribbles同源蛋白1(TRIB1)表达的影响.方法 通过慢病毒转染前列腺癌细胞株DU145使其过表达miR-224,利用划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测细胞TRIB1表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-224与TRIB1基因的直接调控关系.设计拯救实验并重新利用划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭.结果 划痕实验24h后DU145-224和DU 145-vector组细胞的迁移细胞数目分别为(103.2±20.6)、(189.8±34.7)个,miR-224过表达组细胞迁移能力明显下降(P＜0.01);Transwell细胞侵袭实验显示,DU145-224组和DU145-vector组细胞分别为(140.8±13.1)、(283.4±15.4)个,组间差异均有统计学意义(P＜0.01).过表达miR-224后,DU145细胞TRIB1的蛋白表达下调(P＜0.05).荧光素酶报告实验结果显示实验组荧光素酶活性值为0.42±0.06,比对照组(0.97±0.09)显著降低(P＜0.01),提示miR-224能明显抑制TRIB1-3'端非编码区域(3'-UTR)的荧光素酶活性.拯救实验结果表明在miR-224过表达的DU145细胞中进一步转入高表达TRIB1质粒后,迁移细胞数目为(203.2 ±31.2)个、侵袭细胞数目为(328.6 ±25.9)个,对比单纯miR-224过表达DU145细胞[迁移细胞数目为(73.2±17.8)个;侵袭细胞数目为(101.2±13.1)个],迁移和侵袭能力增强,组间差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 过表达miR-224可能通过靶向降低TRIB1基因的蛋白表达,抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力.
关键词： 微小RNA-224 前列腺癌 细胞迁移 细胞侵袭 Tribbles同源蛋白1
