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紫杉醇诱导HepG2肝癌细胞凋亡中miR-224沉默凋亡抑制因子5基因的作用
目的 探讨紫杉醇诱导肝癌HepG2细胞凋亡时miRNA对基因的沉默的作用.方法 用不同浓度紫杉醇处理肝癌HepG2细胞后,流式细胞术检测其细胞凋亡;通过实时定量PCR(Real-time PCR)测定miR-224和凋亡抑制因子5(api-5)mRNA的表达;用免疫组织化学二步法和免疫印迹法(Western blotting)检测API-5蛋白的表达.结果 紫杉醇诱导HepG2细胞凋亡时,通过2-△△CT法分析发现,除了0.5mg/L、1 mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h miR-224不升反降外,其他浓度和处理时间miR-224表达均显示上调;0.5mg/L、1 mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h api-5 mRNA表达稍微降低,0.5mg/L紫杉醇处理48h无增长,其他浓度和处理时间api-5 mRNA表达均上调;应用IPP v 5.1图像分析软件处理,经t检验分析发现,紫杉醇处理后API-5蛋白表达均下调(P＜0.05).结论 上调的miR-224可能作用其靶基因api-5的表达,通过与api-5 mRNA的3'UTR结合阻止翻译的完成,从而对肝癌细胞的凋亡途径产生影响.
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凋亡抑制因子5在卵巢癌中的表达及临床意义
目的 检测凋亡抑制因子5(API5)在卵巢癌中的表达,分析其与临床病理特征的关系.方法 Western blotting方法检测2例正常卵巢组织及6例不同级别的卵巢癌组织的表达,组织化学方法检测10例正常卵巢、119例卵巢癌(浆液性腺癌61例、黏液性癌5例、内膜样癌10例、透明细胞癌10例及未分化癌33例)组织中API5的表达,分析其表达与临床病理参数及5年生存率之间的相关性,细胞转染及凋亡流式细胞分析检测API5及顺铂对卵巢癌细胞的作用.结果 API5在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织,API5的表达与临床病例特征之间密切相关,Kaplan-Meier生存曲线揭示API5表达高的卵巢癌患者较低表达患者生存率低,流式细胞术分析显示,抑制API5的表达能增加顺铂对卵巢癌细胞的敏感性.结论 API5的异常表达与卵巢癌的发生密切相关,提示API5在预后评价中具有潜在的临床应用价值,有可能成为卵巢癌治疗的潜在靶点.
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丝氨酸/苏氨酸激酶Pim-2在肝细胞癌组织中的表达及意义
目的 探讨丝氨酸/苏氨酸激酶Pim-2在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义.方法 收集重庆医科大学附属第二医院肝胆外科2006年1月至2007年12月收治的肝细胞癌患者27例,手术切除的肝细胞癌、相应癌旁组织以及同期重庆市江津区中心医院收治的非肿瘤性肝叶切除术11例的正常肝组织为对照,并分为肝癌组织组(HCC)、癌旁组织组(PNL)和正常肝组织组(NL),分别通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot及凝胶迁移实验(EMSA)检测各组标本中Pim-2、核因子(NF)-κB和凋亡抑制因子5(API-5)的mRNA水平,Pim-2、tAPI-5和pAPI-5的蛋白水平及NF-κB的活性度,并对检测结果进行分析.结果 Pim-2在肝细胞癌中的mRNA和蛋白水平(0.129 676±0.007 427、1.300000±0.232 890)均较癌旁组织(0.048 063± 0.004 113、0.970 000±0.223 120)和正常肝组织(0.029 125±0.002 911、0.470 000±0.100600)中显著增高(P＜0.05)；NF-κB在肝细胞癌中的mRNA水平和蛋白活性度(0.152 134±0.008 024、216.73±12.36)均较癌旁组织(0.062 129±0.004 860、185.57 ±9.42)和正常肝组织(0.029 771±0.002 957、49.50 ±2.68)中显著增高(P＜0.05)；API-5的mRNA水平、tAPI-5和pAPI-5的蛋白水平在肝细胞癌(0.017701±0.002024、1.680 000±0.298 440、1.510000± 0.299 830)中显著高于癌旁组织(0.005 069±0.000 764、1.006 300±0.233 210、0.990000±0.175 080)和正常肝组织(0.001 500±0.000280、0.490 000±0.122 560、0.342 700±0.071 290) (P＜0.05).NF-κB和API-5的mRNA水平随着Pim-2 mRNA水平的变化而平行变化；tAPI-5和pAPI-5的蛋白水平及NF-κB活性度也随着Pim-2蛋白水平的变化而平行变化.结论 在HCC中,Pim-2与API-5及NF-κB呈正相关,Pim-2、NF-κB及API-5的高表达可能与HCC的发生有关.
