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羧基荧光素乙酰乙酸与四甲基偶氮唑盐法检测人脐血间充质干细胞刺激脾淋巴细胞增殖作用的比较
目的 比较羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)与四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测人脐血间充质干细胞(CB-MSCs)和神经分化的CB-MSCs对大鼠脾淋巴细胞(LCs)刺激作用的敏感程度. 方法 分别制备刺激细胞和LCs,将刺激细胞分为4组:1. CB-MSCs组;2. Dif-CB-HSCs组:脐血间充质干细胞培养7d后维甲酸(RA)处理4d诱导其神经分化细胞;3. SH-SY5Y组:人源SH-SY5Y细胞(人神经母细胞瘤细胞系)作为阳性对照组;4. Auto-LC组:自体大鼠LCs作为阴性对照组.分别将上述各组刺激细胞与LCs进行混合培养,分别通过酶标仪(MTT法),流式细胞术(CFSE法)检测LCs增殖情况( n =3). 结果 CFSE法和MTT法检测结果 均显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组刺激LCs增殖明显弱于阳性对照组(SH-SY5Y细胞组),但CFSE法检测结果 显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组细胞刺激LCs增殖百分率高于阴性对照Auto-LC组,MTT法检测结果 显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组的吸光度( A )值稍低于阴性对照Auto-LC组. 结论 CFSE法比MTT法能更加客观地反映淋巴细胞增殖情况,在实际应用中更具有优势.
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活体染料羧基荧光素乙酰乙酸标记视网膜色素上皮细胞的体外研究
视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPECs)的退化导致视网膜感觉层的继发性改变,甚至产生视力丧失.RPECs的移植治疗仍是临床和研究的热点[1].其中,移植细胞的标记始终是移植研究的一个难题[2].活体染料羧基荧光素乙酰乙酸[5-(and-6)-carboxyfluresceindiacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE]初是用于研究淋巴细胞增殖[3],具有染色好、阳性率高、观察结果直观可靠、并可长期追踪标记细胞等优点,现已被应用于标记血细胞,并成功的用于移植细胞的定位及标记[4,5].我们首次将此染料用于标记RPECs,深入探究此标记方法的可行性及优点,为今后RPECs移植研究开辟了广阔的前景.
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羧基荧光素乙酰乙酸在移植免疫研究中的应用
目的:介绍和探讨活体荧光示踪染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)在移植免疫研究中的应用及价值.方法:以不同浓度的CFDA-SE标记小鼠脾细胞用于体内外实验.标记Balb/c(H2d)和C57BL/6小鼠(H2b)脾细胞行混合淋巴细胞培养,流式细胞术观察标记细胞的增殖情况.Balb/c裸小鼠(H2d)构建移植物抗宿主(GVHR)、宿主抗移植物(HVGR)模型;通过流式细胞术检测标记细胞在外周血及脾的增殖情况. 结果:荧光显微镜观察到标记细胞.流式细胞术检测到标记细胞荧光强度出现倍减现象,表明细胞发生了增殖;无抗原刺激组荧光强度无明显变化,抗原刺激后24～72 h标记细胞停留在脾,第3天后增殖细胞进入外周血液. 结论:羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记技术可应用于体内、体外实验,有助于对细胞增殖及定位进行检测,在移植免疫实验研究中具有很高的应用价值.
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视网膜色素上皮细胞移植中CFDA-SE及免疫组化研究
目的探讨新型染料羧基荧光素乙酰乙酸[5-(and-6)-carboxyflurescein diacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE]与免疫组化方法相结合在视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPECs)移植中应用的可行性.方法用CFDA-SE(10 μmol·L-1)标记供体RPECs,37 ℃下孵育1 min,通过玻璃体视网膜显微手术将细胞悬液植入同种异体青紫蓝兔视网膜下腔,分别在30 d和60 d时处死实验兔,荧光显微镜下观察标记的供体细胞,同时作紧密连接的结构蛋白ZO-1和细胞骨架蛋白Actin的免疫组化分析.结果荧光显微镜下观察到标记的供体RPECs可嵌插于宿主RPECs之间,铺成单层结构,并形成新的细胞间紧密连接,ZO-1、Actin的免疫组化结果经统计分析表明与原位RPECs之间的表达无显著差异(ZO-1:︱t︱=2.05,P《0.05;Actin:︱t︱=2.14,P《0.05).结论 CFDA-SE是一种快捷、稳定、安全的活体细胞染料,可作为理想的标记物应用于RPECs移植中.
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氧化苦参碱抑制二硝基氟苯所致小鼠接触性皮炎及淋巴细胞增殖
目的 探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响.方法 建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化;利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响.结果 OMT对DNFB所致小鼠ACD呈剂量依赖性抑制作用,且与同等剂量HCT作用效果相似,但副作用明显减小;体外实验证明,在500、125和31 μg/mL组OMT对小鼠淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制.结论 OMT对DNFB所致小鼠ACD有显著的抑制作用,而且抑制小鼠淋巴细胞增殖;OMT是一种免疫抑制剂.
关键词： 二硝基氟苯变应性接触性皮炎 氧化苦参碱 羧基荧光素乙酰乙酸 淋巴细胞 增殖 -
CFDA-SE和Hoechst两种荧光标记技术在嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤中的应用
目的 将CFDA-SE和Hoechst两种常用的细胞荧光标记技术在嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤中的应用进行比较,选出一种更适合的方法进行推广.方法 取20只脊髓完全横断的SD大鼠,其中10只移植用CFDA-SE标记的嗅鞘细胞,另10只移植用Hoechst标记的嗅鞘细胞.结果 两种标记方法都能成功标记上,但Hoechst对移植后组织的污染率较高,CFDA-SE染色清楚,对受区组织干扰较少.结论 CFDA-SE相比Hoechst在嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤中进行荧光标记更清楚、更准确,值得推广.
