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5401基因文献资料
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鸡柔嫩艾美耳球虫江苏分离株5401基因的克隆、序列分析及原核表达
分别以孢子化卵囊及第2代裂殖子为材料,应用RT_PCR技术克隆了柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)江苏分离株5401基因.测序结果表明该序列全长为864 bp,序列本身是一个开放阅读框,将克隆得到的基因与国外报道的5401基因比较,第174位和第287位发生突变,碱基分别由T突变为C,由C突变为T.第1个为无义突变,第2个突变引起第96位氨基酸由A变为V.其核苷酸序列同源性为99.8%,氨基酸同源性为99.7%.将所获5401基因克隆到pGEX-4T-2获得重组质粒pGEX-4T-2-5401,转入宿主菌BL21中,用IPTG进行诱导表达.用大鼠抗柔嫩艾美耳球虫子孢子高免血清对原核表达产物进行Western Blotting检测,结果表明有2条融合蛋白,大小分别为90 kDa和80 kDa左右.
