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前列腺素E2在尿液浓缩调控中的作用
机体对体液稳态的维持主要通过调控尿液的浓缩和稀释来实现.血管升压素是尿液浓缩和稀释的关键性调节激素,能够通过促进水通道蛋白-2(AQP2)的膜转位,增加集合管对水的通透性,从而增加水的重吸收,使尿液浓缩.除了血管升压素以外,一些肾脏局部生成的物质也以自分泌或旁分泌的形式参与了肾脏尿液浓缩的调控,比如前列腺素E2(PGE2).PGE2是花生四烯酸的代谢产物,通过与四种G蛋白偶联受体(EP1；EP2；EP3；EP4)作用,广泛地参与了多种生理和病理生理过程.研究表明PGE2参与了尿液的浓缩过程,在肾脏不同部位由于其合成或作用的受体不同,对尿液浓缩起促进或抑制作用.PGE2及其合成酶和受体在尿液浓缩过程中的作用,可以为临床体液紊乱疾病提供新的治疗靶点.
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PGE2通过cAMP-PKA信号转导通路促进肝癌细胞VEGF表达
目的:探讨PGE2对人肝癌细胞HuH7 VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路.方法:用PGE2、EP1-4四种受体激动剂、SQ22536+PGE2、H89+PGE2处理HuH7细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化.结果:10μmol/LPGE2处理HuH7细胞24 h后,VEGFmRNA的表达水平上升了264%(P＜0.01)、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平上升了24%(P＜0.01);10 μmol/L PGE2处理HuH7细胞6、12、24 h后,胞浆中VEGF蛋白的表达水平分别上升了13.6%、25.7%、39.6%(P＜0.01);10μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞24 h后.胞浆、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平与对照组相比分别上升了32.3%、20.1%(P＜0.01),而10 μmol/L EPl、EP3、EP4受体激动剂处理HuH7细胞24 h后,VEGF的表达水平无明显改变;30 μmol/L PKA抑制剂(H89)、500 μmol/L腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)处理HuH7细胞24 h后,胞浆VEGF的表达水平分别为对照组的91.6%、89.6%,细胞培养上清中VEGF的表达水平分别为对照组的98_3%、91.9%.与PGE2组相比均有统计学差异(P＜0.01).结论:PGE2可上调HuH7细胞VEGF的表达,其作用机制可能是通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路所致.
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PGE2对HuH7细胞Survivin表达影响的研究
目的:研究前列腺素E2(PGE2)对人肝癌细胞HuH7 Survivin表达的影响及其与PI3K/AKT信号转导通路的相关性.方法:用PGE2、EP受体激动剂、EP受体抑制剂、PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞,用Western blot检测Survivin蛋白表达.结果:5 μmol/L PGE2处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比上升了63.59%(P＜0.01);5 μmol/L EP1、5μmol/L EP3、5 μmol/L EP4受体激动剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比分别上升了114.76%(P＜0.01),76.68%(P＜0.01),70.01%(P＜0.01),而5 μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比无明显改变(P＞0.05);10 μmol/L EP1,10 μmol/L EP4受体抑制剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比分别下降了32.95%(P＜0.01),28.36%(P＜0.05),而10 μmol/L EP2受体抑制剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比无明显改变(P＞0.05);10 μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比下降了28.05%(P＜0.01).结论:PGE2可能通过EP1、EP3、EP4这3种受体影响HuH7细胞中Survivin的表达,且这种调节作用可能与PI3K/Akt信号转导通路有关.
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肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究
目的:基于肝癌细胞(肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞)对PGE2的不同反应性,研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1肝癌细胞株前列腺素E2受体的表达类型和分布定位.方法:体外培养肝细胞癌细胞株(Hep3B,HuH7)和胆管上皮癌细胞株(SG231,HuCCT1),分别给予不同浓度的外源性PGE2处理,以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率;以RT-PCR实验检测上述细胞4种PGE2受体(EP1、EP2、EP3和EP4)的mRNA表达情况;采用上述肝癌细胞的细胞涂片或细胞爬片进行荧光免疫细胞化学实验,于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述4种EP受体蛋白的表达和定位分布.结果:WST-1细胞增殖实验结果显示PGE2可以促进Hep3B和HuH7细胞的生长,但对胆管上皮癌细胞(SG231、HuCCT1细胞)则表现为生长抑制作用;RT-PCR和荧光免疫细胞化学实验结果表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1细胞株均有4种EP受体的表达;激光共聚焦结果显示4种EP受体不仅有胞浆、胞膜定位,而且部分在胞核也有表达,其中EP4受体的表达主要定位于细胞核.结论:Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1,4种肝癌细胞株均可以表达EP1、EP2、EP3和EP4受体,且受体的细胞内定位不同.肝癌细胞对前列腺素E2的反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关.
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前列腺素E2通过G蛋白偶联EP1受体对腰椎软骨终板细胞生长的影响
[目的]检测前列腺素E2( prostaglandin E2,PGE2)通过G蛋白偶联前列腺素E受体1(prostaglandin E receptorl,EP1)对腰椎软骨终板细胞生长的影响.[方法]常规方法培养腰椎软骨终板细胞；应用RT - PCR和蛋白免疫印迹技术检测细胞EP基因及蛋白质表达水平.应用MTT实验评估EP1受体选择性激动剂17 -P -T - PGE2和EP1受体选择性抑制剂SC 51322对细胞生长增殖的影响.[结果]RT - PCR和Western blotting实验检测结果表明,软骨终板细胞均表达EP1、EP2、EP3和EP4.MTT实验检测显示EP1受体激动剂17 -P -T - PGE2可促进软骨终板细胞生长,EP1受体选择性抑制剂SC 51322可抑制PGE2促起的软骨终板细胞生长.[结论]PGE2引起的软骨终板细胞增殖可能与EP,信号转导通路激活相关.
