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AIDS合并马尔尼菲青霉病患者外周血Dectin-1、炎症细胞因子及CD4+T淋巴细胞表达情况及其临床意义
目的 探讨AIDS合并马尔尼菲青霉菌病(PsM)患者模式识别受体Dectin-1、炎性细胞因子及CD4+T淋巴细胞表达情况及其临床意义.方法 将120例AIDS患者根据是否合并PsM分为PsM组和非PsM组各60例,比较两组Dectin-1的平均荧光强度、CD4+T淋巴细胞计数和白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-12、IL-23水平.结果 PsM组的Dectin-1表达、CD4+T淋巴细胞计数、IL-2、IL-6、IL-12 和IL-23水平均低于非PsM组(P<0.05).结论 Dectin-1及其调节产生的炎症细胞因子、CD4+T水平下降可能是导致AIDS的患者对马尔尼菲青霉菌易感的重要原因.
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真菌β-葡聚糖受体Dectin-1胞外识别区的克隆和原核表达
目的 为探讨真菌β-葡聚糖受体胞外识别区相关基因的分子功能,对小鼠巨噬细胞上的Dectin-1基因进行克隆、原核表达及鉴定分析.方法 以小鼠巨噬细胞总RNA为模板.用RT-PCR扩增其Dectin-1基因的细胞外糖识别域,并重组到原核表达载体pET28a(+)中.转入E.coli BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达.通过SDS-PAGE和Western blot对目的 蛋白进行检测分析鉴定.结果 阳性重组质粒经Nde和Xho I双酶切得到552 bp和5 369 bp两条片段.重组质粒测序.与GenBank上的相应序列比对完伞一致.且输入片段读码框与表达载体读码框吻合.SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量为22 000;West-ern blot检测出特异性阳性信号.该蛋白可识别、绑定酵母多糖.结论 本研究成功构建了真菌β-葡聚糖受体胞外识别区基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达相应的蛋白,为进一步探讨该基因在真菌识别中的功能奠定了基础.
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Dectin-1mRNA在寻常型银屑病患者皮损中的表达
目的 检测寻常型银屑病患者皮损组织中dectin-1 mRNA的表达,探讨dectin-1在银屑病发病中的可能机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测15例寻常型银屑病患者皮损组织及15例正常皮肤组织中dectin-1 mRNA的表达.结果 寻常型银屑病患者皮损中dectin-1 mRNA的表达为(0.01020±0.00686),较正常皮肤组织(0.00232±0.00073)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Dectin-1 mRNA表达水平在寻常型银屑病患者皮损中明显升高,其可能在寻常型银屑病患者皮肤局部免疫反应中起作用.
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抗Dectin-1单克隆抗体在白念珠菌刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和NO中的作用
目的 探讨抗Dectin-1单克隆抗体在白念珠菌刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)中的作用.方法 ①体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,设置处理组(抗Dectin-1单克隆抗体组)、阴性对照组与空白对照组,分别给予灭活或活的白念珠菌刺激.②刺激1h, 3h, 6h, 8h后用酶联免疫吸附试验检测各组分泌的TNF-α水平,③刺激6h后Griess法检测各组产生NO的水平.结果 ①刺激1h后抗体浓度为20μg/mL处理组分泌的TNF-α水平(79.82±11.74pg/mL)低于阴性对照组(105.15±12.36pg/mL)(P<0.05),3h, 6h, 8h后各浓度处理组TNF-α水平均低于阴性对照组(P均<0.01),且呈浓度依赖性;②6h后各浓度处理组NO水平(61.24±8.85μmol/L,45.36±3.92μmol/L,36.37±2.58μmol/L)均低于阴性对照组(87.65±9.17μmol/L)(P<0.05).结论 抗Dectin-1单克隆抗体在白念珠菌刺激小鼠巨噬细胞释放TNF-α和NO中发挥抑制作用.
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腺病毒介导的Dectin-1基因小鼠呼吸道表达模型的构建和评价
目的：研究采用气管内注射给予Dectin?1重组腺病毒的方法建立气道Dectin?1上调表达小鼠模型，并进行模型验证和安全性评价．方法：BALB／c小鼠分为PBS组、Ad?EGFP （ recombinant adenovirus encoding EGFR ）组、 Ad?mDectin?1（recombinant adenovirus encoding murine Dectin?1）组，经气管给予 PBS、Ad?EGFP、Ad?mDectin?1．通过 real?time PCR、免疫组化等方法动态评估肺组织Dectin?1表达变化．通过ELISA检测肺组织匀浆及血液中IL?6水平，激光共聚焦检测腺病毒载体在肺组织及肝脏的分布．结果：气管内给药后，在第3天可以观察到Ad?mDectin?1组小鼠肺组织Dectin?1 mRNA水平约为PBS组、Ad?EGFP 组的18倍． Ad?mDectin?1组与对照组比较，差异具有统计学意义（ P＜0．05）．给药后第3、5、7、14天， Ad?mDectin?1组免疫组化见 Dectin?1主要定位于细支气管．随时间推移，Dectin?1水平逐渐增高，第5天达高峰，第14天气道上皮细胞仍有Dectin?1表达．给药后第3天，激光共聚焦显微镜观察Ad?mDectin?1显示在肺组织中Ad?mDectin?1组及Ad?EGFP组可见绿色荧光，而PBS组未见绿色荧光．在肝脏组织中，各组均无绿色荧光蛋白表达．肺组织及血清中IL?6水平检测示各组差异无统计学意义（P＞0．05）．结论：通过气管内给予 Ad?mDectin?1成功上调小鼠肺组织 Dectin?1水平， Dectin?1主要表达于细支气管上皮细胞，表达高峰在第5天，可持续2周以上．另外，经气管给予Ad?mDectin?1对小鼠生存和活动无明显影响，无明显炎症反应及远隔器官肝脏的播散．
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白色念珠菌的形态转换在免疫逃逸机制中的作用
白色念珠菌是以酵母相和菌丝相存在二态性真菌,其细胞壁富含葡聚糖(β-glucans),葡聚糖可被植物凝集素样固有免疫受体Dectin-1识别,引发吞噬细胞的吞噬和杀菌作用,并释放大量细胞因子.研究发现,在白色念珠菌形态转换的过程中,高度保守的葡聚糖是机体免疫系统识别的主要靶点.本文就β葡聚糖、Dectin-1受体及天然免疫反应中的作用进行综述.
