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p47 GTPase缺失对小鼠巨噬细胞成熟及功能的影响
目的 以日本血吸虫感染小鼠为模型,研究p47 GTP酶家族成员IGTP 及IRG-47缺失对巨噬细胞发育成熟及功能的影响. 方法 常规方法建立日本血吸虫感染小鼠模型,通过实时荧光定量PCR观察日本血吸虫不同感染时期igtp或irg47单一基因缺失的巨噬细胞igtp、lrg47和irg47的mRNA水平;流式细胞术检测巨噬细胞表面分子MHC-Ⅱ类(I-A)、CD16/32、CD40和CD80的表达;应用硝酸还原酶法检测感染急性期巨噬细胞产生炎症因子NO的能力. 结果 巨噬细胞igtp、irg47及lrg47基因在感染血吸虫后3周表达快速上调,感染后6周上调表达的幅度相差各异,IRG-47-/-小鼠igtp和lrg47转录明显上调.感染前和感染后3周IGTP-/-组的巨噬细胞表面CD16/32和CD40表达均较IRG-47-/-组和WT组高;感染后6周表达差异均无统计学意义(P>0.05).在感染后6周,无有丝分裂原刺激情况下IGTP-/-组的巨噬细胞较IRG-47-/-组和WT组产生更高水平的NO;LPS刺激后,3组巨噬细胞产生的NO水平差异无统计学意义(P>0.05). 结论 IGTP 及IRG-47缺失不影响巨噬细胞发育成熟,也不影响巨噬细胞产生炎症因子NO的潜能,提示p47 GTP酶可能具有独特的、不依赖NO的作用方式.
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IL-10在感染日本血吸虫p47 GTP酶缺失小鼠中的免疫调节作用
目的 在日本血吸虫早期感染模型和SEA致敏模型中,研究IGTP和IRG-47缺失小鼠在抵抗日本血吸虫感染过程中IL-10的免疫调节作用.方法 以IGTP基因敲除(IGTP~(-/-))小鼠、IRG-47基因敲除(IRG-47~(-/-))小鼠和野生型(WT)小鼠为研究对象,建立日本血吸虫早期感染模型和可溶性虫卵抗原(SEA)致敏模型.在早期感染模型中,以HE染色观察耳廓的病理变化,间接ELISA法检测耳廓皮片培养上清中Th1/Th2型细胞因子的表达水平;在SEA致敏模型中,以间接ELISA法检测血清中日本血吸虫特异性IgG抗体、脾单个核细胞培养上清中Th1/Th2型细胞因子的表达水平;以及流式细胞术检测脾细胞亚群比例的变化.结果 日本血吸虫感染7 d后,IGTP~(-/-)、IRG-47~(-/-)和WT小鼠的耳廓病理变化无显著差异;但IRG-47~(-/-)小鼠耳廓培养上清中IL-10水平显著低于IGTP~(-/-)小鼠.SEA致敏小鼠3周后,IGTP~(-/-)小鼠血清中SEA特异性IgG抗体水平显著低于WT小鼠;IRG-47~(-/-)小鼠脾细胞在体外SEA刺激下,产生的IL-10水平显著高于IGTP~(-/-)小鼠和WT小鼠;流式结果显示IRG-47~(-/-)小鼠脾中Th2细胞比例显著低于WT小鼠.结论 SEA是IRG-47缺失小鼠抵抗日本血吸虫、促使宿主产生保护性应答的重要调节因素,IL-10在此过程中是重要的免疫调节分子.
