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PCR检测蚊体内恶性疟原虫子孢子方法的建立
为建立能检测蚊体内恶性疟原虫的聚合酶链反应技术,根据恶性疟原虫 CSP基因序列,设计合成1对引物,以Chelex-100煮沸法制备DNA模板,采用PCR方法,恶性疟原虫子孢子模板预期被扩增出245 bp的DNA条带,并将该法与蚊虫解剖镜检子孢子方法相比较. 结果经人工感染恶性疟原虫的31只大劣按蚊中14只PCR阳性,被扩增出预期大小的DNA 片段,其余17 只PCR阴性;以该技术检测野外捕捉的98只按蚊,结果均为阴性.PCR法与解剖镜检法相比较,检测结果完全符合;相当于1/10个阳性蚊子的模板即可满足PCR检测. 该检测体系灵敏、特异,对于蚊体内恶性疟原虫的检测具有一定的应用价值.
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海南省间日疟原虫环子孢子蛋白基因分型及地理分布
目的确定海南省疟区间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因型及地理分布,为制定合理的防治对策提供科学依据.方法采用套式等位特异聚合酶链反应(PCR)技术,检测在海南省疟区内感染的间日疟病人滤纸血滴样本.结果在99份受检血样中,有54份显示约700 bp和约180 bp二条扩增带,为温带族虫株,占54.54%;33份显示约700bp扩增带,为热带族虫株,占33.33%;12份显示约700 bp和588 bp两条扩增带,为PV-2型虫株,占1 2.1 2%.结论海南省流行的间日疟原虫CSP呈多态性,且存在地理分布差异.
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应用CSP基因型简捷PCR鉴定法对间日疟原虫分型的初步评价
目的初步评价CSP基因型简捷PCR鉴定法在对间日疟原虫进行分型时的实用性.方法利用套式等位特异PCR,检测间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因结构多态,以产生的多样性DNA片段作为对间日疟原虫分型的依据.结果经检测42份被镜检确诊为间日疟滤纸血样,被分型33份,分型率为78.57%,温带型占30.30%(10/33),热带型占69.70%(23/33),未检到PV-Ⅱ型间日疟原虫.当第二次对33份血样检测时93.94%(31/33)被分型,其分型符合率为77.42%(24/31).结论该方法简便、快速,且分型不受采血时机限制,但作为云南间日疟的分型方法时,其稳定性仍需提高.
