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MKK1和MKK2基因文献资料
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细粒棘球蚴MKK1和MKK2基因原核表达载体的构建及其诱导表达
目的 分别构建细粒棘球蚴(Eg)丝裂原活化蛋白激酶激酶MKK1和MKK2基因原核表达载体,诱导表达并纯化EgMKK1和EgMKK2蛋白.方法 采集绵羊肝脏感染的Eg原头蚴,Trizol法提取原头蚴总RNA,反转录PCR分别扩增EgMKK1和EgMKK2基因片段,克隆至原核表达载体pET28a(|),经限制性内切酶双酶切和测序鉴定正确后转化大肠埃希菌感受态细胞BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用镍柱亲和层析法纯化蛋白,并进行SDS-PAGE分析.结果 测序证明pET28a EgMKK1和pET28a-EgMKK2原核表达载体构建正确,在37 C经IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导可表达EgMKK1和EgMKK2蛋白,分子质量单位分别为44.96 ku和64.01 ku,与理论值相符,且以包涵体形式存在.表达产物纯化后的可溶性蛋白EgMKK1和EgMKK2含量分别为0.64 mg/ml 和 1.2 mg/ml.结论 成功构建了MKK1和MKK2基因原核表达载体,表达蛋白可用于动物免疫,为研究EgMKK1和EgMKK2在Eg体内的生物学作用奠定了基础.
关键词： 细粒棘球绦虫 MKK1和MKK2基因 基因表达 蛋白纯化
