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扎伊尔埃博拉文献资料
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埃博拉病毒核蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立
目的 建立快速而准确的检测蝙蝠埃博拉病毒(EBOV)核蛋白抗体ELISA方法. 方法 合成大肠埃希菌系统密码子优化的扎伊尔埃博拉病毒核蛋白羧基端序列,构建含His标签的原核表达载体pET-28(a)-Z-NP,并转化BL21(DE3)感受态细胞,用1.0 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,目的蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Westernblot鉴定,以纯化蛋白为包被抗原建立抗体间接ELISA方法. 结果 成功构建原核表达质粒pET-28 (a)-Z-NP,可溶表达的目的蛋白纯化后经Western blot检测,能与His单抗和已知阳性血清特异性反应.建立的ELISA方法检测轮状病毒、来宾病毒、汉城病毒、玄松病毒感染蝙蝠血清均无交叉反应,已知阳性血清稀释至1∶1 600仍为阳性,试验的批内及批间变异系数均＜10％.用此方法检测采自云南省西双版纳地区的15份棕果蝠血清,其中2份阳性,且与Westernblot验证结果一致. 结论 建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,可用于蝙蝠扎伊尔埃博拉病毒核蛋白抗体的检测.
