首页 > 文献资料
-
HCV NS2对细胞凋亡及DNA损伤应答信号的影响
目的 构建HCV NS2的真核表达质粒,了解HCV NS2蛋白对细胞凋亡及DNA损伤应答信号的影响. 方法 以pCMV-tag2B为载体,采用双酶切法构建HCV NS2基因重组载体pCMV-tag2B-NS2,进行酶切分析和DNA测序鉴定;在Huh7细胞中转染相应质粒,分别采用Western blot和DAPI染色分析CPT处理或未处理时NS2对DNA损伤应答信号和凋亡的影响,采用流式细胞术检测NS2蛋白对细胞周期的影响. 结果 酶切和DNA测序证实pCMV-tag2B-NS2重组质粒构建成功,HCV NS2蛋白可在Huh7细胞中正确表达并且活化DNA损伤应答信号,但不影响细胞周期进程;DAPI染色检查,NS2转染组和空载体转染组细胞凋亡率分别为(15.33±0.88)％和(4.66土0.88)％,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 成功构建了真核表达载体pCMV-tag2B-NS2,其表达产物HCV NS2蛋白可诱导DNA损伤应答通路的活化并且促进Huh7细胞凋亡.
-
丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式调节基因NS2TP的克隆化
目的:克隆化HCV非结构蛋白2(NS2)蛋白反式调节靶基因(NS2TP).方法:依据我们构建的HCV NS2反式调节基因差异表达的cDNA消减文库筛选结果,利用分子生物学与生物信息学技术获得新基因NS2TP的编码序列,设计特异性引物,并对其进行克隆化研究.结果:NS2TP基因编码区为456核苷酸(nt),编码产物为151氨基酸残基(aa),经核苷酸序列数据库(GenBank)和蛋白质一级结构序列数据库(SwissProt)同源序列的搜寻,与已知基因序列和蛋白序列之间没有显著同源性,属于未知功能新基因.结论:发现了HCV NS2反式调节新的靶基因.
-
应用抑制性消减杂交技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式调节基因
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白2(NS2)反式调节基因cDNA消减文库,研究HCV NS2蛋白的反式调节基因.方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选转染pcDNA3.1(-)-NS2和空载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞差异性表达基因,并进行生物信息学分析.结果:获得12个差异表达的已知蛋白基因和3个未知功能基因序列,包括:磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3, GPC3)、酸性核糖体磷蛋白PO、核糖体蛋白L13a、整合素β1、天冬酰胺合成酶、信号肽酶、α-2-HS-糖蛋白、小核糖体蛋白多肽G、蛋白酶样亚单位、黄体酮受体、SDR家族脱氢酶8、Ras家族RAB4A、具有BTB/POZ结构的新蛋白、具有coiled-coil-helix结构的新蛋白、未知功能基因.结论:成功构建HCV NS2反式调节的相关基因cDNA消减文库,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制提供了线索.
