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病毒融合蛋白质文献资料
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戊型肝炎病毒ORF3融合蛋白对L02细胞增殖和凋亡的影响
[目的]检测()RF3融合蛋白对L02细胞增殖与凋亡的影响.[方法]将重组质粒ORF3-pEGFP和ORF3pXF2RH脂质体法转染L02细胞.用MTT比色法测定细胞增殖情况,用流式细胞仪碘化丙啶染色法检测细胞周期和细胞凋亡情况.[结果]转染重组质粒的L02细胞自第4d开始,明显增殖(P＜0.05)；102细胞凋亡率由转染前的1.41％分别下降为0.83％和0.88％,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]戊型肝炎ORF3融合蛋白可减少102细胞凋亡,而使L02增殖速度增加(P＜0.05).
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HEV ORF3真核表达载体的构建、鉴定和真核表达
目的 构建表达戊型肝炎病毒(HEV)ORF3-pXF2RH融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的L02细胞系.方法 利用PCR技术从HEV基因组中扩增出ORF3基因片断,Hind Ⅲ/EcolⅠ双酶切后连接到经同样酶切的pXF2RH真核表达载体,转化DH5α菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒ORF3-pXF2RH.将阳性克隆用脂质体法转染L02细胞系,G418筛选抗性克隆,SDS-PAGE、Western blot分析鉴定ORF3-pXF2RH融合蛋白的表达.结果 真核表达质粒转染L02细胞,SDS-PAGE显示在28.5kD左右蛋白表达量明显高于对照组,Western blot在28.5kD左右有一条强的棕色条带.结论 成功构建ORF3-pXF2RH真核表达质粒,在L02细胞表达融合蛋白,为进一步研究该蛋白生物学功能奠定了基础.
