您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
P22表面抗原文献资料
-
弓形虫表面抗原P22基因片段的克隆、表达及鉴定
目的扩增弓形虫表面抗原P22基因编码序列,并进行表达和鉴定. 方法设计合成引物,PCR法从RH株弓形虫基因组DNA中扩增P22基因编码序列,克隆入载体pET-32a,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定. 结果从弓形虫基因组DNA中扩增出P22基因编码序列,并诱导表达出能被兔抗弓形虫血清识别的重组P22. 结论成功获得弓形虫表面抗原P22的表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究创造了条件.
关键词： 弓形虫 P22表面抗原 克隆 蛋白表达 Western blot -
弓形虫表面抗原P22编码基因片段的亚克隆与表达
目的亚克隆弓形虫RH株表面抗原P22编码基因,构建表达质粒pBK/P22,并对其在大肠杆菌(E.coli)中的表达作初步研究. 方法以限制性内切酶BamHⅠ和KpnⅠ双酶切质粒pBCG5.6/P22,获得弓形虫表面抗原P22编码基因目的片段,在以低熔点琼脂糖回收纯化后,插入表达质粒载体pBK-CMV的多克隆位点,构建重组体pBK/P22,并转化大肠杆菌DH 5α,快速酚法初筛阳性重组子,阳性克隆以PCR法与限制性酶切分析鉴定后,以IPTG进行诱导在E.coli DH 5α中表达,表达产物以SDS-PAGE与免疫印迹分析. 结果双酶切质粒pBCG5.6/P22,获得约593 bp的P22编码基因片段,与预期片段大小相符;所构建pBK/P22重组体阳性克隆经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致;SDS-PAGE与免疫印迹显示,表达产物的大小约28 ku. 结论成功亚克隆并构建了弓形虫表面抗原P22编码基因pBK/P22表达质粒,诱导表达了弓形虫P22表面抗原蛋白,为抗原免疫特性的研究奠定了基础.
