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  • 白色念珠菌CaTIP41基因高表达菌株的构建及鉴定

    作者:刘伟;陶敏敏;管赟;刘志超;张晋鸣;冯金荣

    目的 构建白色念珠菌CaTIP41基因高表达菌株,并观察其高表达对细胞耐受遗传毒性试剂MMS的影响.方法 将白色念珠菌CaTIP41基因的ORF置于高表达质粒载体pCaEXP的MET3启动子后,构建pCaEXP-CaTIP41高表达质粒,线性化后整合到基因组的RP10位点,利用半定量PCR和RT-PCR方法检测CaTIP41基因转录水平,利用平板表型试验结合菌株存活率试验检测CaTIP41基因高表达对细胞耐受遗传毒性试剂的影响. 结果 成功构建了高表达载体pCaEXP-CaTIP41;线性化后的载体成功整合到基因组上RP10位点,其中4号转化子中CaTIP41基因转录水平较高,为野生型菌株的4.23倍;在MMS胁迫条件下,CaTIP41基因高表达菌株存活率明显下降. 结论 利用pCaEXP载体成功构建了CaTIP41基因高表达菌株,且CaTIP41基因高表达会抑制细胞对遗传毒性试剂MMS的耐受.

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