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EM18-GST原核表达载体的构建及空间结构的生物信息学分析
目的 构建GST-EM18原核表达质粒,优化EM18-GST重组蛋白诱导表达条件,通过生物信息学预测EM18蛋白的空间结构. 方法 以pMD18-T/ Em18为模板,扩增EM18基因的CDS区,构建pGEX-3X-EM18,设计不同诱导表达条件表达EM18-GST蛋白.通过各种在线网站对EM18蛋白空间结构进行生物信息学预测. 结果 成功构建GST-EM18原核表达质粒,以1 mmol/LIPTG于37℃诱导4h,蛋白表达较好;生物信息学预测EM18蛋白N端为无规卷曲,之后紧连两个a螺旋,C末端为无规卷曲和较短的片层结构. 结论 成功构建了GST-EM18原核表达质粒,表达的EM18蛋白含有无规则卷曲,可能是抗原表位所在位置.
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多房棘球蚴EM18基因片段的克隆与生物信息学预测
目的 寻找EM18抗原表位.方法 用逆转录PCR方法从多房棘球蚴的RNA扩增EM18基因片段,运用各软件对EM18的二级结构和表面特性、亲水性、理化性质、可及性、免疫原性和可塑性等方面进行分析,预测其抗原表位.经3DLigandsite服务器结构预测其编码的蛋白质的3D结构.结果 EM18存在潜在的抗原表位,B细胞表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144.结论 运用生物信息学方法确定EM18存在8个抗原表位,对进一步研究EM18的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要的意义.
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应用噬菌体7肽库筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位的初步研究
目的:从噬菌体7肽库中筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位,为研究和开发新的包虫病诊断抗原提供实验依据.方法:用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,进一步纯化,获得抗Em18多克隆抗体IgG,以之作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机7肽库.经过5轮的淘筛过程,随机挑取9个蓝色噬菌斑扩增,核苷酸序列测定分析并与Em18进行同源性比较.结果:经5轮筛选后,阳性克隆得到富集,9个噬菌体克隆的氨基酸序列与Em18无同源性.结论:所得肽段可能是Em18抗原模拟表位.
