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反转录基因克隆文献资料
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刚地弓形虫致密颗粒蛋白GRA2全基因的原核重组表达
目的 克隆弓形虫RH株致密颗粒蛋白2(GRA2)的全长基因,在大肠埃希菌工程菌中重组表达GST-HisGRA2融合蛋白.方法 提取弓形虫总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增GRA2基因全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠埃希菌RosettaTM (DE3) pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白,然后采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白产物.结果 PCR鉴定弓形虫GRA2全基因重组表达质粒构建正确;诱导表达的GST-His-GRA2融合重组蛋白分子质量单位为52 ku,与预测值相符.结论 本研究成功构建了弓形虫GRA2全基因重组蛋白质粒,该质粒能表达GRA2蛋白,为研究GRA2与宿主细胞的相互作用奠定了基础.
关键词： 刚地弓形虫 致密颗粒蛋白GRA2 反转录基因克隆 原核表达 -
弓形虫致密颗粒蛋白GRA7的全基因原核重组表达
目的 克隆弓形虫RH株致密颗粒蛋白7(GRA7)的全长基因,在大肠杆菌工程菌中重组表达GST-His-GRA7融合蛋白.方法 提取弓形虫总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增GRA7基因全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM (DE3) pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白,后采用SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白产物.结果 构建了弓形虫GRA7全基因的重组表达质粒,诱导表达了GST-His-GRA7融合重组蛋白,分子量为62kD,与预测结果相符.结论 研究获得了弓形虫GRA7全基因的重组蛋白,为进一步研究弓形虫GRA7抗原性及其与宿主细胞的相互作用奠定了基础.
关键词： 刚地弓形虫 致密颗粒蛋白GRA7 反转录基因克隆 原核重组表达
