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MNNG诱导日本血吸虫成虫培养细胞的扫描电镜观察
目的观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对不同培养时间日本血吸虫成虫培养细胞作用的变化,确定培养细胞发生转化进而增殖的佳诱导时间. 方法将23～28 d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液,接种于小盖玻片上,培养于含20%小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中.将接种培养第4、5、6、7、8 d的细胞分别设为5个实验组及其相应的对照组.实验组用含终浓度为3 μg/ml MNNG的常规培养基处理48 h,对照组用不含MNNG的常规培养基处理相同时间,嗣后换用常规培养基培养4周,再改用含5%小牛血清的培养基继续培养.MNNG诱导后每周取各组培养细胞固定、制样,每组随机取3张小盖玻片进行电镜扫描观察,连续取样11周. 结果经MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞表面出现形态各异的结构,既有与对照组类似的表面较光滑和有乳突的培养细胞,也有表面光滑如玻璃珠状的细胞,还有具长纤突、微嵴、皱褶、微绒毛、蜂窝和仙人球状等形态的细胞;实验1组培养至第5周即出现大量分裂细胞. 结论 MNNG诱导培养第4 d的日本血吸虫成虫细胞培养至第5周可发生转化而出现分裂、增殖.
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MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖类物质作用
目的研究甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对日本血吸虫成虫培养细胞糖类物质动态的影响.方法将日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,置于RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养.培养第4 d,细胞被随机分为实验组和对照组.实验组细胞用含3μg/ml MNNG的常规培养基处理48 h,对照组细胞用不含MNNG的常规培养基作相同处理.细胞经彻底清洗后,继续以常规培养基培养3周,然后换用含5%小牛血清的低血清培养基培养.NNNG处理后第1～8周,每周取实验组和对照组细胞进行高碘酸雪夫(PAS)染色和淀粉酶处理后的PAS染色,观察培养细胞内糖类物质的含量及分布变化.取培养第6周的染色细胞,用HPIAS-2000图像分析仪测定细胞内代表糖含量的吸光度,并作统计学分析.结果随着培养时间的延长,对照组培养细胞的着色逐渐变浅,糖含量逐渐减少;实验组细胞的着色则逐渐加深,糖类物质和糖原含量均增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).MNNG处理后第5周,实验组细胞着色深,核质着色型第二类细胞和分裂细胞数目显著增加.结论MNNG诱导后,日本血吸虫成虫培养细胞内糖原和糖类物质含量均明显增加,分裂细胞增多.
关键词： 日本血吸虫 糖类 细胞化学 甲基硝基亚硝基胍(MNNG)
