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CTXM-15型大肠埃希菌的分子分布特征及质粒传播规律研究
目的 探讨CTX-M-15型大肠埃希菌的分子分布特征及质粒传播规律. 方法 232株CTX-M-15型大肠埃希菌鸟枪法测序序列从GenBank数据库获取,利用CGE在线工具获得菌株的MLST分型、耐药基因及质粒类型信息,应用eBURST软件绘制MLST分型结果聚类图. 结果 232株CTX-M-15型大肠埃希菌共检测出 37个MLST型别,其中以ST131菌株检出率较高,为35.34％(82/232).菌株中耐药基因数目为1～22个不等,出现耐药基因数目较多菌株的ST型别为ST131和ST617,其中blaOXA-1、aac(6') Ib-cr、aac(3)-Ⅱ、aadA、mph(A)等7种耐药基因在ST131菌株和非ST131菌株中的分布差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),且ST131菌株检出率高于非ST131菌株(P＜0.05或P＜0.01).菌株巾检测到blaOXA48、blaKPC2、HaNDM1、blaCMy、blaVIM等其他类型的β-内酰胺类耐药基因,主要的β内酰胺基因组合形式是blaTEM1+blaCTXM15,而在ST131中主要的组合形式是blaOXA1+blaCTX-M-14(32/82).检测到的不相容性质粒的类型有9种,其中IncF型质粒的检出率较高,为95.26％(221/232),该质粒在ST131菌株中的检出率为98.78％(81/82).菌株中IncF型复制子类型出现频率较高的是IncFIA+IncFIB+IncFII(83/232),在ST131菌株中上述复制子中检出率较高的是IncFIA+IncFII,为51.22％(42/82).IncF型质粒经pMLST分型可获得59种型别,F36:A4:B1、F31:A4:B1、F48:A1:B49型质粒主要存在于ST131菌株和CC10克隆复合体巾,而ST131菌株中主要的质粒类型是F2:A1:B-(38/82). 结论 CTX-M-15型耐药基因主要存在于ST131型别的大肠埃希菌株中,ST131菌株比其他菌株具有更强的适应能力,同种型别的质粒可以在亲缘关系相近的菌株之间传播.
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威海市区CTX-M型具有头孢他啶水解活性的ESBLs基因型调查
目的 调查威海市区具有头孢他啶(ceftazidime,CAZ)水解活性的头孢噻肟(cefotaxime,CTX)M型产超光谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)基因型,了解其种类、比例、传播机制以及对CAZ的耐药特点,评估目前CAZ药敏折点对产CTX-M型ESBLs菌株的影响.方法 对威海市区3家医院2012年临床分离的产ESBLs的120株大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli进行研究,采用特异性引物扩增TEM、SHV、CTX-M系列基因,测序后进行序列分析；挑选产生单一ESBLs基因型的菌株,采用琼脂稀释法测定其对CTX、CAZ的小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值；接合实验了解具有CAZ活性的CTX-M型ESBLs编码基因所在质粒是否为接合性质粒,以及接合子的MIC范围.结果 120株ESBLs E.coli中检出产生blaCTX-M-55的E.coli共40株(33.3％),产生blaCTX-M-15型者26株(21.7％),产生blaCTX-M-101及blaCTX-M-123型分别为2株(1.7％)和3株(2.5％),这四种基因型共占71株(59.2％).基因序列分析表明,这四种基因在725位有1个碱基的差异(GAC→GGC),导致240位氨基酸由天冬氨酸变为甘氨酸.产单一基因型blaCTX-M-15、55、101和123的菌株共55株.药敏试验结果显示,上述55株ESBLs大肠埃希菌对CTX均耐药,对CAZ的MIC值范围为8～128 μg/mL,耐药率为74.5％(41/55).接合实验发现,上述4种基因可以通过接合而传递耐药性.其接合子对CAZ、CTX的MIC值较亲本降低1～8倍,接合子对CTX均耐药,对CAZ的MIC值范围为4～128 μg/mL,耐药率为22.8％(8/35).结论 威海市区大肠埃希菌产生的具有CAZ水解活性的ESBLs基因型主要为blaCTX-M-55,其次为blaCTX-M-15,blaCTX-M-101和blaCTX-M-123较少.耐药基因所在的质粒为可接合性质粒.blaCTX-M-15、55、101、123型ESBLs基本适合目前的CLSI CAZ折点,可直接向临床报告药敏结果.鉴于可水解CAZ的CTX-M型ESBLs在临床菌株中检出率较高,对于治疗表型敏感的ESBLs大肠埃希菌引起的感染应避免单独使用CAZ.
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产超广谱β-内酰胺酶宋内志贺菌的检测
目的 了解宋内志贺菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型别.方法 K-B法测定5株宋内志贺菌对常用抗菌药物的耐药性,CLSI推荐的确证试验进行产ESBLs菌株的表型鉴定,并进行接合试验;采用TEM、SHV、CTX 3种β-内酰胺酶基因通用引物进行PCR扩增和DNA序列分析;同时进行指纹分析脉冲场检测.结果 5株宋内志贺菌对青霉素类、第一、二代头孢菌素、第三代头孢菌素中的头孢噻肟及庆大霉素、磺胺类显著耐药,对喹诺酮类抗菌药物中度敏感,对头孢他啶、四代头孢、阿米卡星、美罗培南敏感;这些菌株的ESBLs基因型均为CTX-M-15,CTX-M-15编码基因型可接合方式发生水平转移;4株菌株的PFGE谱型相同,1株不同.结论 5株宋内志贺菌产生CTX-M-15型ESBLs,引发对多种抗菌药物耐药,并存在克隆传播,需要加强检测.
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CTX-M-15基因在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌头孢他啶耐药株中的检测
[目的]了解CTX -M - 15基因与大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢他啶耐药的关系.[方法]筛选ESBLs阳性且对头孢他啶耐药的菌株为实验组,对头孢他啶敏感而对头孢曲松耐药的菌株为对照组.多重PCR方法检测CTX -M- 14,CTX -M- 15基因.[结果]实验组CTX-M - 15基因检出率高达75.9％,单纯CTX -M- 15基因为40.6％,同时存在CTX - M15、CTX -M- 14基因为35.2％.而对照组检出率分别为:17.7％、5.9％、11.8％.[结论] CTX- M- 15基因是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢他啶耐药的主要机制,建议临床合理使用抗生素,避免引起流行.
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CTX-M-15型ESBLs的传播机制和基因环境的研究进展
CTX-M-15是一种同时具备水解头孢噻肟和头孢他啶能力的超广谱B-内酰胺酶,目前在世界各地广泛、快速的传播,甚至在局部地区出现暴发流行.本文就CTX-M-15酶的分子特点,流行病学及CTX-M-15编码基因(blaCTX-M-15)及其基因环境等研究方面作一综述.
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广州地区具有水解头孢他啶活性的CTX-M型ESBLs的调查
目的 对广州地区具有水解头孢他啶活性的CTX-M型ESBLs进行调查,了解其种类、比例以及传播机制,为临床抗生素的使用提供指导.方法 对广州地区多家医院2007年到2008年临床分离的非重复的确证产ESBLs的181株大肠埃希菌和180株肺炎克雷伯菌进行研究,PCR方法确定CTX-M型ESBLs的基因型,MIC检测菌株对抗菌药物的敏感性;接合实验了解CTX-M型的ESBLs编码基因(blaCTX-M)所在质粒的大小.结果 检出携带blaCTX-M-15的菌株共86株(23.8%),其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别为39株(21.5%)和47株(26.1%);大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中各检出1株携带blaCTX-M-27的菌株,比率均为0.55%,未发现携带blaCTX-M-16的菌株.接合实验发现,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中携带blaCTX-M-15的质粒分别是65Kb和92Kb大小的可接合性质粒;肺炎克雷伯菌中携带blaCTX-M-27的质粒推测是大小为57Kb的可结合性质粒.结论 广州地区具有水解头孢他啶活性的CTX-M型ESBLs的类犁为CTX-M-15和CTX-M-27,且以CTX-M-15为主.耐药基因所在的质粒为可接合性质粒,能通过接合水平传播.鉴于CTX-M-15型ESBLs在临床菌株中检出率较高,治疗上应避免单独使用头孢他啶.
