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外源性16srRNA甲基化酶研究进展
外源性16S rRNA甲基化酶能介导细菌对多种氨基糖苷类抗菌药物高水平耐药，目前已发现10种外源性16S rRNA甲基化酶；该综述分析了外源性16S rRNA甲基化酶与两类内源性16S rRNA甲基化酶的联系，发现外源性16S rRNA甲基化酶可阻碍特定的内源性16S rRNA甲基化酶的甲基化作用，影响细菌的生长及对抗菌药物的敏感性，对基因环境的分析表明外源性16S rRNA甲基化酶基因常与其他耐药基因位于同一可移动基因元件上，耐药机制复杂，应继续监测外源性16S rRNA甲基化酶的流行情况，深入探讨其耐药机制的形成，以期早日改善临床致病菌耐药情况。
关键词： 16S rRNA甲基化酶 氨基糖苷类 耐药机制 基因环境 -
1株血标本分离的碳青霉烯类、磷霉素耐药大肠埃希菌耐药机制研究
目的 探究复旦大学附属华山医院2010年12月血标本分离的1株碳青霉烯类、磷霉素耐药大肠埃希菌的耐药机制及耐药基因可能的传播方式.方法 对该株大肠埃希菌进行药敏试验、多位点序列分型(MLST)、耐药基因筛选、质粒分型、PCR mapping基因环境分析.结果 该菌株对碳青霉烯类、磷霉素耐药,超广谱β内酰胺酶(ESBL)阳性.MLST属ST46型.碳青霉烯类耐药基因blaKPC-2和磷霉素耐药基因fosA3存在～70 kb接合型质粒上,分别介导碳青霉烯类、磷霉素耐药.β内酰胺酶耐药基因blaTEM、blaCTX-M存在～150kb接合型质粒上,介导菌株对β内酰胺类药物耐药.PCR mapping结果显示blaKPC-2位于Tn 1721-blaKPC-2-Tn3样结构内,fosA3位于IS26-fosA3-IS26移动元件.结论 此株来源于血标本菌株携带blaKPC-2、fosA3、blaEM、blaCTX-M等多种临床常见耐药基因,其耐药机制及耐药基因可能的传播方式,应引起医院感控高度重视.
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肺炎克雷伯菌携带碳青霉烯酶 KPC-2基因环境多态性研究
目的：研究复旦大学附属华山医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌广泛播散初期携带 blaKPC-2的完整基因结构﹐获得其播散的基因背景。方法收集2006年8月―2009年12月连续不重复的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌42株﹐进行质粒抽提、blaKPC-2筛选、多位点序列分型（MLST）；随后设计一系列 PCR 引物﹐对 blaKPC-2基因结构进行完整测序。结果 MLST 分型显示：34株属于 ST11型﹐5株属于 ST423﹐2株属于 ST65﹐1株属于 ST977。主要发现两种携带 blaKPC-2基因结构﹐A 型（8/42）：Tn1721-blaKPC-2-Tn3；B 型（34/42）：Tn1721-blaKPC-2-ΔTn3-IS26﹐且 B 型结构的两端序列存在差异。结论该组中肺炎克雷伯菌携带 blaKPC-2的基因结构存在多态性﹐Tn1721-blaKPC-2-ΔTn3-IS26样结构占优势。研究获得的携带 blaKPC-2基因结构及侧翼的完整序列﹐为进一步正确认识和理解 blaKPC-2的播散模式和机制提供了完整的基因背景。
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肠杆菌科细菌中PER型超广谱β-内酰胺酶的基因检测及遗传特征分析
目的 了解临床分离的肠杆菌科细菌中产PER型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因类型,探讨其流行病学特征及可能的耐药传播机制.方法 收集2009年6月-2014年1月上海交通大学医学院附属瑞金医院临床标本分离到的对头孢他啶、头孢噻肟和头孢吡肟耐药的肠杆菌科细菌共254株,应用PCR技术扩增PER基因并测序确定基因型;对PER阳性菌株进行接合试验,同时利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对其进行流行病学分析,并扩增PER基因上下游序列.结果 临床分离的肠杆菌科细菌中共检出14株携带PER基因,包括PER-1和PER-4两种类型.仅2株奇异变形杆菌接合成功,接合质粒属于IncA/C型质粒.9株PER阳性奇异变形杆菌PFGE共分为7个型别.常见的肠杆菌科细菌基因环境为ISCR1-blaPER-gst-abct,2株产PER-1 型ESBLs的奇异变形杆菌基因环境为ISPa12-blaPER-gst-like-ISPa13.结论 PER基因可存在于多种临床分离的肠杆菌科细菌中.PER基因上游环境多以ISCR1结构为主,该结构在国内PER基因的流行扩散中可能扮演着重要的角色.
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6株超级细菌NDM-1基因环境研究
目的：研究6株超级细菌NDM-1基因环境，探讨耐药基因水平转移机制。方法：收集耐碳青霉烯的G-杆菌400株，利用PCR方法检测NDM-1基因，并测序验证。根据目前报道的NDM-1基因环境常见类型设计系列引物，步移法特异性扩增NDM-1基因上下游序列，并对扩增产物测序和序列分析。步移法检测阴性的菌株进行全基因组HindⅢ酶切，将NDM-1基因及基因环境克隆到pET28a质粒后再测序。结果：400株对碳青霉烯类耐药的G-杆菌中有6株NDM-1阳性。步移法检出其中5株菌的基因环境，包括不动杆菌基因种13TU、产酸克雷伯菌、不动杆菌基因种3、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌。这5株菌的基因环境与文献报道基本一致。产气肠杆菌的NDM-1基因环境经DNA克隆测序获得，从上游至下游为：部分缺失的转座酶Tn3、IS26及ISAba125，blaNDM-1，ble，部分缺失的异构酶trpF和SSen4元件。结论：NDM-1基因上下游常包含转座子或插入序列等元件，为其水平转移奠定基础。
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CTX-M-15型ESBLs的传播机制和基因环境的研究进展
CTX-M-15是一种同时具备水解头孢噻肟和头孢他啶能力的超广谱B-内酰胺酶,目前在世界各地广泛、快速的传播,甚至在局部地区出现暴发流行.本文就CTX-M-15酶的分子特点,流行病学及CTX-M-15编码基因(blaCTX-M-15)及其基因环境等研究方面作一综述.
