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地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞敏感性研究
目的:探讨地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞(LSC)的作用及其机制.方法:应用免疫磁珠法从KG1a细胞中分选LSC.从健康供者的外周血分离纯化同种异体反应性自然杀伤(allo-reactive natural killer,allo-NK)细胞;LDH法检测allo-NK细胞对LSC的杀伤作用,流式细胞术检测allo-NK细胞诱导LSC凋亡及LSC表面NKG2D配体MICA/B和ULBP1-3的表达.结果:地西他滨10 μmol/L处理LSC 24 h后,allo-NK细胞对LSC的杀伤率明显增高,在效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时分别为(60.52％ ±3.52％ vs 22.08％ ±2.07％、73.93％±2.33％ vs 28.99％ ±3.13％、83.08％±1.32％ vs 36.44％±2.40％),差异有统计学意义(P＜0.05);地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,在效靶比为10∶1时,allo-NK细胞诱导LSC的凋亡率为7.84％±0.34％,明显高于LSC未处理组(3.33％±0.64％),差异有统计学意义(P＜0.05);地西他滨10 μmol/L处理LSC 24 h后,LSC表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达上调,高于未处理组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:地西他滨可能通过上调NKG2D配体增强allo-NK细胞对LSC的杀伤作用.
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小白菊内酯抑制CD34+CD38-KG-1a白血病细胞的增殖并增强其被allo-NK细胞杀伤的敏感性
目的:探讨小白菊内酯(parthenolide,PTL)对CD34+ CD38-KG-1a白血病细胞的增殖、Bcl-2表达及其被同种异体NK(allo-NK)细胞杀伤敏感性的影响.方法:免疫磁珠法从KG-1a细胞中分离CD34+ CD38-KG-1a细胞.XTT法检测PTL对CD34+ CD38-白血病细胞增殖的影响,Real-time PCR和Western blotting分别检测PTL对CD34+ CD38-KG-1a细胞Bcl-2mRNA和蛋白表达的影响,LDH释放法观察PTL对CD34+ CD38-KG-1a细胞被allo-NK细胞杀伤敏感性的影响.结果:PTL对CD34+ CD38-KG-1a细胞增殖的抑制呈剂量(2.5 ～ 80 μmol/L)依赖性.PTL浓度为2.5μmol/L时,PTL组CD34+ CD38-KG-1a细胞的增殖抑制率显著高于对照组[(4.89±1.07)％vs0,P＜0.01];PTL杀伤CD34+ CD38-KG-1a细胞的IC50为20μmol/L; PTL组CD34+ CD38-KG-1a细胞Bcl-2 mRNA[(0.105 ±0.007)vs(0.307±0.013),P＜0.01]与蛋白表达均显著低于对照组.在效靶比为10:1,20:1和40∶1时,allo-NK细胞对PTL组CD34+ CD38-KG-1a细胞杀伤率逐步升高,且均高于阴性(无PTL处理)对照组[(19.76±1.01)％,(30.14±0.96)％和(51.48±3.15)％ vs (12.50±1.42)％,(16.90±0.93)％和(31.70± 1.53)％(均P＜0.01)];效靶比为40∶1时,allo-NK细胞对PTL组细胞的杀伤效率显著高于阳性(Bcl-2抑制剂ABT-737处理)对照组[(51.48±3.15)％vs(43.08±2.81)％,P＜0.05].结论:PTL能抑制CD34+ CD38-KG-1a细胞的增殖并增强其被allo-NK细胞杀伤的敏感性,这可能与PTL下调Bcl-2的表达有关.
