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汉防己甲素与5-溴汉防己甲素逆转耐药机制与降低MRP7表达水平有关
本研究的目的是探索汉防己甲素(Tet)与5-溴汉防己甲素(BrTet)逆转耐药的机制是否与调节多药耐药相关蛋白7(MRP7)表达水平有关.采用MTT法检测柔红霉素(DNR)对人白血病敏感细胞株K562与人白血病耐药细胞株K562/A02细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)及耐药倍数.将细胞分组,加入BrTet、Tet,用实时PCR法检测细胞MRP7mRNA表达,Western bolt法检测细胞MRP7蛋白和P-糖蛋白(P-gp)的表达,流式细胞术检测细胞内DNR蓄积.结果表明:K562/A02对DNR的耐药倍数为23.65倍.分别加入1μmol/L Tet与2.0μmol/L BrTet后,K562/A02细胞的MRP7mRNA相对表达水平分别降低至2％和12％,MRP7蛋白表达降低了53.2％与83.7％,P-gp表达分别下调58.47％与52.20％；1.0 μmol/L Tet与2.0μmol/L BrTet分别使K562/A02细胞内DNR提高了94.32％与271％.结论:BrTet与Tet均可逆转耐药,其逆转机制除了抑制P-gp的表达之外,还可能与抑制 MRP7的表达,增加肿瘤细胞内抗肿瘤药物浓度有关.在相同摩尔浓度下,Tet与BrTet对MRP7表达的下调作用无显著性差异.
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5溴汉防己甲素逆转多药耐药的体内体外研究
本研究旨在探讨5-溴汉防己甲素(BrTet)和汉防已甲素(Tet)对K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用.采用MTT法检测阿霉素(ADM)联合应用BrTet、Tet,对K562/A02细胞和K562细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测细胞内ADM浓度和P糖蛋白(P-gp)的表达;采用RT-PCR测定细胞mdr1基因mRNA表达水平.建立裸鼠皮下移植瘤模型,比较BrTet、Tet在体内的逆转耐药作用.结果发现,BrTet在0.25、0.5以及1μmoL/L浓度条件下时K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用呈剂量依赖性.流式细胞术检测提示,BrTet显著增加K562/A02细胞内ADM浓度,并呈剂量依赖性,同时抑制P-gp的表达,下调mdr1 mRNA的表达.在荷瘤鼠模型中,BrTet明显增加ADM时K562/A02移植瘤的抗肿瘤作用,从单用ADM的5.8%上升至26.1%,而在K562移植瘤中没有显著差异.结论:BrTet在体内体外试验中均显示出显著的逆转MDR作用,其活性可能与抑制P-gp的过度表达和增加抗肿瘤药物的积聚有关.
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尼洛替尼联合5-溴汉防己甲素逆转K562/A02细胞耐药的研究
目的 探讨尼洛替尼、5-溴汉防己甲素(BrTet)及其联合应用对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用及其机制.方法 尼洛替尼、BrTet单独或联合作用于K562/A02细胞,应用MTY法检测细胞增殖抑制率、流式细胞术检测细胞凋亡率、RT-PCR检测mdr1 mRNA的表达及Western blot分析P糖蛋白(P-gp)的表达的情况.结果 5 nmol/L尼洛替尼和0.5μmol/L BrTet单独使用48 h后,柔红霉素(DNR)对K562/A02细胞的IC50分别为4.52 mg/L和5.41 mg/L,联合使用后,DNR对K562/A02细胞的IC50降为2.98 mg/L.单用DNR、尼洛替尼和BrTet均不能增加K562/A02细胞凋亡率(P>0.05),DNR联合尼洛替尼和BrTet后细胞凋亡率明显增高.单用5 nmol/L尼洛替尼和0.5μmol/L BrTet 48 h后,K562/A02细胞mdr1 mRNA灰度值为0.48±0.04、0.64±0.01,两者合用K562/A02细胞mdr1 mRNA灰度值下降为0.35±0.04.单用5 nmol/L尼洛替尼作用48 h,P-gp的表达水平为0.61±0.05;单用0.5μmoL/L BrTet作用48 h,P-gp的表达水平为0.52 ±0.02;两者合用K562/A02细胞P-gp的表达水平降为0.44±0.03.结论 单独应用尼洛替尼和BrTet均可部分逆转K562/A02细胞的耐药,机制可能与降低mdr1 mRNA和P-gp的表达及增加K562/A02细胞凋亡有关,并且两药联用具有明显的协同作用.
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5-溴汉防己甲素与汉防己甲素对K562/A02细胞多药耐药性逆转作用的比较
背景与目的: 5-溴汉防己甲素(5-bromotetrandrine, BrTet)是汉防己甲素(tetrandrine, Tet)的溴化产物,具有逆转P-糖蛋白(P-glyeoprotein, P-gp)介导的肿瘤多药耐药(muhidrug resistance, MDR)的作用.本研究旨在比较BrTet与Tet对人白血病细胞K562/A02多药耐药的逆转作用.方法:采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)法检测不同浓度BrTet对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应;检测阿霉素(adfiamycin, ADM)对K562细胞和K562/A02细胞增殖的抑制作用,以及加用BrTet、Tet时上述抑制作用的变化,并计算半数抑制浓度(IC50)及逆转倍数.Western blot法检测各组细胞P-gp的表达,流式细胞仪检测各组细胞内ADM的蓄积.结果:K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为49.51倍.2.0 μmol/L及更低浓度的BrTet和1.5 μmol/L及更低浓度的Tet对K562细胞和K562/A02细胞抑制率均小于10%,无明显细胞毒性作用.加入1.0 μmol/L的Tet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为12.17倍.加入0.25、0.5和1.0 μmol/L的BrTet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数分别为17.88、9.97和4.24倍.1.0μmol/L的BrTet和let分别使K562/A02细胞内ADM浓度提高了69.0%和51.6%,使P-gp表达分别下调了51.1%和43.73%,其差异具有统计学意义(P<0.05).结论:BrTet及Tet均可逆转K562/A02细胞耐药,且前者较后者逆转作用更强,逆转机制与抑制P-gp的表达、增加细胞内抗肿瘤药物浓度有关.
关键词： 多药耐药 逆转剂 5-溴汉防己甲素 汉防己甲素 K562/A02细胞
