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沉默Sam68基因对Jurkat细胞增殖影响的研究
本研究探讨Sam68基因对人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖的影响.针对Sam68 mRNA 531-552靶位点设计并合成shRNA,构建pLKO-Tet-On条件性真核干扰载体,制备慢病毒并感染Jurkat细胞;应用强力霉素(Doxycycline)诱导干扰载体表达,用Real-time PCR和Western blot验证干扰效率,用改良MTT法检测沉默Sam68基因对Jurkat细胞活力的影响,用体外细胞集落形成实验观察沉默Sam68基因对细胞集落形成能力的影响,用流式细胞术分析沉默Sam68前后细胞周期的变化.结果表明:与对照组相比,实验组Sam68基因的表达被有效抑制(P＜0.05);沉默Sam68基因降低了Jurkat细胞活力,抑制了细胞的集落形成能力并且导致S期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低(P＜0.05).结论:利用shRNA靶向干扰Sam68基因的表达可以有效抑制人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖.
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Sam68基因过表达可促进乳腺癌MCF-7细胞发生上皮-间质转化
目的:探讨Sam68 (Src-associated in mitosis 68 kD)对乳腺癌MCF-7细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、增殖、迁移和侵袭的影响.方法:将重组质粒pcDNA-3-Sam68转染至乳腺癌MCF-7细胞后,应用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测Sam68以及EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)mRNA及蛋白的表达,CCK-8法和Transwell小室法分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭情况.结果:重组质粒pcDNA-3-Sam68转染MCF-7细胞48 h后,Sam68mRNA和蛋白明显过表达(P值均＜0.05).EMT标志物E-cadherin、N-cadherin和vimentin mRNA的表达水平无明显变化(P值均＞0.05),E-cadherin蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05),而N-cadherin和vimentin蛋白的表达水平则明显上调(P值均＜0.05).并且,细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增强(P值均＜0.05).结论:过表达Sam68基因可增强乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力,这一作用可能与调控EMT的发生有关.
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沉默Sam68基因表达抑制乳腺癌细胞的上皮-间质转化
目的:探讨沉默Sam68 (Src-associated substrated during mitosis of 68KD)基因表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法:采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测具有不同侵袭能力的乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中Sam68 mRNA及蛋白的表达情况;选择Sam68高表达的MDA-MB-231细胞,利用siRNA技术沉默细胞中内源性Sam68蛋白的表达.随后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin) mRNA及蛋白的表达;采用CCK-8法、Transwell小室迁移和侵袭实验检测沉默Sam68基因表达后对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,迁移和侵袭的影响.结果:Sam68蛋白在高侵袭性的间质型乳腺癌MDA-MB-231细胞中高表达(P＜0.05);采用siRNA沉默MDA-MB-231细胞内源性Sam68蛋白的表达后,E-cadherin的表达水平明显上调(P＜0.05),而vimentin的表达水平明显下调(P＜0.05);MDA-MB-231细胞的增殖能力以及细胞的迁移和侵袭能力明显降低(P值均＜ 0.05),细胞可能发生间质-上皮转化.结论:Sam68在高侵袭性乳腺癌细胞中高表达,沉默Sam68基因的表达能抑制EMT的发生,并降低细胞增殖、侵袭和迁移能力.
