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NOV及BNIP3基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达及其意义
本研究探讨NOV及BNIP3基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达及意义.给小鼠经尾静脉接种小鼠粒单核细胞白血病细胞株WEHI-3,随机将小鼠分成化疗组和对照组,然后在接种后不同时间点取2组小鼠骨髓组织,采用qRT-PCR方法动态检测NOV、BNIP3 mRNA的表达情况,分析其表达与白血病发生及发展的关系.结果表明:对照组小鼠NOV、BNIP3 mRNA表达水平在接种后2周开始逐渐增高,死亡时达到高峰,分别由接种前的1.85E-05与3.44E-03,升高至濒死时的3.57E-02与3.48E-02(p<0.05).化疗组小鼠2种基因的表达率则在化疗后迅速降至2.51E-05与1.58E-03(p<0.05),与接种前水平相近(p>0.05),复发时再次升高,死亡时2基因表达率与对照组无明显差异(p>0.05).结论:NOV及BNIP3基因在白血病小鼠中表达明显增高,其表达异常可能参与了小鼠白血病的发生与发展;;2种基因表达率与疗效密切相关,因此NOV和BNIP3表达水平在疗效评估及MRD检测中具有重要价值.
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BNIP3基因甲基化与早期结直肠癌患者临床病理特征的关系
目的 分析早期结直肠癌组织中BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化与患者临床病理特征的关系,评价其在结直肠癌发生发展中的作用.方法 用甲基化特异性PCR技术分析107例早期结直肠癌患者肿瘤组织中BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化状态.结果 本组结直肠癌组织标本中BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化阳性率为58.9% (63/107).右半结肠组肿瘤组织中BNIP3基因甲基化明显高于左半结肠组(P<0.001);低分化组明显高于高中分化组(P=0.002).BNIP3基因甲基化在患者性别、年龄、肿瘤大小和分期等分组间无明显差异.结论 早期结直肠癌组织中存在BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化.BNIP3基因高甲基化与早期结直肠癌部位和分化程度密切相关.
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胃癌细胞中BNIP3基因CpG岛甲基化及其调控作用
目的：观察胃癌细胞株MKN1中BNIP3基因启动子区的甲基化状态，探讨DNA甲基化调控BNIP3表达的机制。方法应用亚硫酸氢盐修饰后克隆测序法检测MKN1细胞中BNIP3基因启动子区的甲基化状态，应用甲基化抑制剂5?氮杂?2′?脱氧胞苷（5?Aza?CdR）处理MKN1细胞，观察给药前后BNIP3 mRNA表达及启动子区CpG岛甲基化状态的改变。应用染色质免疫沉淀技术检测BNIP3基因与DNA甲基化转移酶1（DNMT1）的结合。结果 MKN1细胞中BNIP3基因启动子区呈高甲基化状态。应用5?Aza?CdR处理细胞后，药物处理组（5?Aza?CdR浓度为10μmol/L）和对照组甲基化率和BNIP3 mRNA表达的差异均有统计学意义（P<0.05）。5?Aza?CdR抑制MKN1细胞中DNMT1与BNIP3基因的结合。结论 MKN1细胞中BNIP3基因表达受启动子区CpG岛甲基化调控，DNA甲基化的发生与DNMT1和BNIP3基因结合有关。
关键词： BNIP3基因 DNA甲基化 胃肿瘤 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 -
BNIP3基因与人类肿瘤的关系
随着肿瘤分子生物学研究的不断深入,人们越来越认识到细胞凋亡紊乱在肿瘤发生、发展过程中的重要作用.细胞凋亡即程序性的细胞死亡,是细胞由控制的有序的死亡.细胞凋亡减少可引起肿瘤的发生,细胞逃避凋亡而促进肿瘤细胞的恶化及演进[1].细胞凋亡不仅在肿瘤发生和发展中有重要意义,而且亦是肿瘤治疗的基础,化放疗和生物治疗都主要是通过诱导凋亡来治疗肿瘤[2].
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Bnip3基因的表达调控及其与肿瘤的关系
Bnip3基因属于Bcl-2基因家族BH3-only亚家族,是一种线粒体促凋亡基因,是缺氧诱导因子(HIF)的下游应答基因之一.在缺氧条件下,Bnip3可诱导细胞发生凋亡或自噬,目前研究发现Bnip3与多种肿瘤发生发展及治疗密切相关,针对Bnip3基因的分子靶向治疗与放化疗联合,在肿瘤治疗上有较好的应用前景.
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人BNIP3基因真核表达载体的构建及其对HT-29细胞化疗敏感性的影响
目的 构建人BNIP3真核表达载体,观察BNIP3高表达对人结肠癌细胞HT-29化疗敏感性的影响.方法 PCR法扩增BNIP3基因,酶切后插入质粒pEGFP-C3,构建重组真核表达载体pEGFP-C3/BNIP3.脂质体转染人结肠癌细胞HT-29,Western blot检测BNIP3蛋白表达.MTT法检测5-氟尿嘧啶(5-Fu)的化疗敏感性和细胞增殖,AnnexinV-APC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡.结果 酶切电泳分析和DNA序列测定证实,重组质粒pEGFP-C3/BNIP3构建成功；转染重组质粒的HT-29细胞BNIP3蛋白明显高表达.与未转染组和转染空质粒pEGFP-C3组比较,转染pEGFP-C3/BNIP3组5-Fu的IC50值显著降低[(120.11 ±5.45)、(113.40 ±4.72) μg/mL vs (19.08 ±2.62) μg/mL,P＜0.05],细胞凋亡率显著增加[(5.51±0.32)％、(7.19±0.47)％vs (41.72±1.48)％,P＜0.05],细胞克隆形成显著减少[(52±6)、(49±5)vs(11±3),P＜0.05],细胞增殖速度减慢.结论 成功构建了人BNIP3真核表达载体,BNIP3高表达可增加HT-29细胞对5-Fu的化疗敏感性.
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RNA干扰BNIP3表达对LoVo细胞5-氟脲嘧啶化疗敏感性的影响
目的:观察RNA干扰介导BNIP3基因表达抑制对结肠癌细胞5-氟脲嘧啶(5-Fu)化疗敏感性的影响.方法:构建靶向BNIP3基因的siRNA的质粒表达载体,转染结肠癌LoVo细胞并筛选稳定表达细胞,用RT-PCR和Western blotting检测BNIP3基因表达,MTF法检测5-Fu的化疗敏感性,流式细胞仪检测5-Fu诱导的细胞凋亡,细胞生长曲线检测细胞增殖.结果:酶切和测序证实靶向BNIP3基因的siRNA的质粒表达载体(pGCsi3.0-BNIP3)构建成功;重组质粒转染的LoVo细胞BNIP3表达被有效抑制,其mRNA水平和蛋白水平表达抑制率分别为73.1%和75.4%;与对照组比较,转染重组质粒pGCsi3.0-BNIP3的LoVo细胞5-Fu的IC50值显著升高(108.4±4.69μg/ml vs.50.08±2.85μg/ml,P<0.05),5-Fu诱导的细胞凋亡率显著减少(8.35±0.46%v 19.75±2.37%,P<0.05),细胞增殖速度增加.结论:BNIP3表达下调导致结肠癌LoVo细胞对5-Fu化疗敏感性降低;BNIP3可能成为逆转结肠癌耐药的潜在治疗靶点.
