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还原型谷胱甘肽抗白血病免疫佐剂作用实验研究
本研究探讨还原型谷胱甘肽(GSH)逆转反应性氧代谢物(ROM)对NK细胞抗白血病效应的抑制作用.在K562细胞、NK细胞的混合培养体系中分别加入富含单核细胞的单个核细胞(Mo)和白细胞介素-2(IL-2),观察ROM产量和K562细胞抑制率,然后分别加入GSH或二氢氯化物组胺(组胺),观察ROM产量及K562细胞抑制率的变化.结果表明:加入IL--2后,ROM的产量从33.17±25.02U/L增至223.59±59.41 U/L(P＜0.01),K562细胞抑制率从65.56%升至85.89%(P＜0.01);在加入E/Mo=10/1、10/5、10/10 3种浓度的Mo后,ROM产量分别为389.79±43.83 U/L,456.74±42.77 U/L,601.42±21.92 U/L,K562细胞抑制率分别为82.36%,81.36%,48.09%,加入组胺或GSH后,E/Mo=10/2时,ROM产量从389.79±43.83 U/L,分别减至50.21±22.4 U/L和-3.58±9.49U/L(P＜0.05),随着GSH或组胺浓度的增加ROM产量逐减少,K562细胞抑制率从82.53%分别升至94.64%和96.39(P＜0.05),ROM产量与K562细胞抑制呈负相关(P＜0.05);E/Mo=10/5或10/10时,高浓度的GSH或组胺可使ROM产量减少,但K562细胞抑制率提高不明显(P＞0.05).结论:当E/Mo=10/2时,GSH逆转ROM强于组胺,提高NK细胞对K562的抑制率与组胺相似,但毒副作用轻微,GSH可能成为更理想的抗白血病的免疫佐剂.
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反应性氧代谢物清除剂逆转ROM对NK细胞抗K562细胞系体外抑制作用
为了探讨新型反应性氧代谢物(reactive oxygen metabolites,ROM)清除剂在NK细胞抑制K562细胞时作为免疫佐剂的作用,采用IL-2及PHA活化单核(MO)细胞,使MO细胞的ROM产量增加,观察NK细胞活性和K562细胞抑制率(KIR)的相应变化,然后在不同比例的MO+NK+K562细胞培养体系中加入不同浓度的ROM清除剂(硫普罗宁),定期检测ROM产量及KIR(每种检测均做3个复孔),同时应用不同浓度的二氢氯组胺(DHT)作为阳性对照.结果表明:在K562细胞、NK细胞混合培养体系中,当E/T=10/1时,加入IL-2/PHA后ROM的产量从33.17±25.02 U/ml增至223.59±59.41 U/ml(P＜0.05),KIR从65.56%升至85.89%(P＜0.05);当按E/MO=10/2、10/5、10/10三种比例加入MO细胞后,ROM产量随着MO细胞数量的增加而增加(ROM产量分别为389.79±43.83 U/ml,456.74±42.77 U/ml,601.42±21.92 U/ml),而KIR则相反(KIR分别为82.36%,81.36%,48.09%);而在K562+NK+MO+IL-2/PHA混合培养体系中加入硫普罗宁、DHT后,当E/MO=10/2时,ROM产量从389.79±43.83 U/ml分别降至-1.20±60.70 U/ml和50.21±22.4 U/ml(P＜0.05),KIR则从82.53%分别升至96.09%和94.64%(P＜0.05).随着硫普罗宁、DHT浓度的增加,ROM产量逐渐减少.ROM产量与KIR呈负相关(r=-0.518).当E/MO为10/5或10/10时,各浓度硫普罗宁及高浓度的DHT可使ROM产量减少(P＜0.05),但KIR提高不明显(P＞0.05).硫普罗宁在提高KIR的效应方面与DHT相似(P＞0.05),而在清除ROM方面,硫普罗宁较DHT为优(P＜0.05).结论:①MO细胞是ROM产生的主要来源,其产生的ROM可使NK细胞的抗瘤(抗K562)活性下降;②新型ROM清除剂(硫普罗宁)可有效清除ROM,在一定程度上逆转ROM对NK细胞抗K562细胞的抑制作用,且在逆转ROM方面优于DHT,在提高NK细胞对K562细胞的抑制率方面效应强度与DHT相似,但毒副作用较低,有望替代DHT作为免疫佐剂用于白血病的过继性免疫治疗中.
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单核细胞影响NK细胞抗K562细胞活性的实验研究
目的 探讨单核细胞(MO)呼吸爆发过程中产生的反应性氮代谢物(RNM)、反应性氧代谢物(ROM)的情况及其对NK细胞抗K562细胞活性的影响.方法 在NK+K562混合细胞培养体系中,观察加入MO或/和IL-2/PHA前后RNM、ROM产量、KIR及TNF-β、IFN-γ产量的相应变化.再观察加入氢氯组胺、硫普罗宁后上述各指标的变化情况.结果 ①在NK+K562混合培养体系中,加入IL-2/PHA后,KIR逐渐升高;当按E/MO=10/2、10/5、10/10比例加入MO后,RNM、ROM产量随着MO数量的增加而增加,而TNF-β、IFN-γ的产量和KIR反而降低.对K562细胞数量作偏相关分析,RNM与KIR的负相关系数大于ROM.②加入药物后,ROM产量明显下降,KIR和TNF-β、IFN-γ产量明显升高,硫普罗宁还降低RNM的产量,但二氢氯组胺无效.结论 ①MO可通过产生ROM、RNM降低NK细胞的活性,抑制NK细胞抗K562细胞效应;②RNM对NK细胞的影响可能比ROM更强.③硫普罗宁通过清除ROM、RNM,可逆转MO对NK细胞的抑制作用.
