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DNMT3b基因在骨髓瘤RPMI8226细胞株中的表达及其生物学意义
目的:研究多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226中DNMT3b基因的表达情况并分析其生物学意义.方法:ELISA方法检测RPMI 8226中DNA甲基转移酶的活性;半定量RT-PCR及实时荧光定量PCR方法检测RPMI 8226细胞中DNMT3b基因mRNA的表达;不同浓度地西他滨干预RPMI8226细胞24h后观察细胞增殖及DNMT3b基因mRNA表达水平的变化.结果:RPMI8226细胞中DNMT活性升高,DNMT3b基因mRNA表达水平升高.不同浓度地西他滨干预24 h后RPMI8226细胞增殖抑制,发生凋亡,DNMT3b基因mRNA表达水平降低.结论:骨髓瘤RP-MI8226细胞中DNMT3b基因表达水平升高,地西他滨可能通过抑制DNMT3b表达从而抑制RPMI8226细胞增殖并诱导其凋亡.因此,DNMT3b有望作为骨髓瘤治疗的新靶点.
关键词： 多发性骨髓瘤 RPMI8226细胞株 DNMT3b基因 地西他滨 -
乳腺癌MCF-7细胞的分子生物学特征
目的 研究乳腺癌MCF-7细胞的分子生物学特征.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP),对MCF-7细胞进行Stratifin和CyclinD2基因甲基化检测;采用RT-PCR法,检测Stratifin、CyclinD2和Dnmt3b基因的mRNA表达.结果 乳腺癌MCF-7细胞系中,Stratifin基因是非甲基化的,mRNA表达水平较高;CyclinD2基因完全甲基化,mRNA表达缺失;Dnmt3b基因呈明显表达.结论 Stratifin和CyclinD2基因的甲基化发生,可能下调其mRNA的转录表达,MCF-7细胞的这些分子生物学特性可为乳腺癌的表观遗传学研究提供一定的参考价值.
关键词： 乳腺癌 MCF-7细胞 Stratifin基因 CyclinD2基因 DNMT3b基因 甲基化 表达 -
DNMT3B基因启动子C46359T与燃煤型砷中毒关系探讨
目的:检测DNA甲基化转移酶(DNA methytransferase,DNMT) DNMT3B基因启动子区-149位点CA6359T单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP),探讨DNMT3B启动子区-149位点SNP与地砷病易感性是否具有一定的关联.方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP).结果:(1)砷中毒人群DNMT3B启动子区CT杂合型频率为4.89％,TT纯合型频率为95.11％,未检出CC纯合型;对照组人群中DNMT3B启动子区CT杂合型频率为4.76％,TT纯合型频率为95.24％,未检出CC纯合型;该基因该多态位点基因型分布在砷中毒人群和对照组人群中差别无统计学意义(P＞0.05);(2)根据文献报道的数据,将对照组人群与中国北部人群、美国白种人群、英国人群基因型分布进行比较,发现对照组人群与中国北部人群差别无统计学意义(P＞0.05),对照组人群与美国白人、英国人比较,差别具有统计学意义(P＜0.01).结论:(1)本次实验未观察到DNMT3B基因启动子区-149位点C46359TSNP与罹患地砷病存在关联;(2)对照组人群DNMT3B基因启动子区-149位点SNP与北方人群报道基因型分布一致,在该基因该位点SNP检测方面为中国人群基因库提供了基础数据.
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反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响
目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响.方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化.结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.%±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响.结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用.
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p53基因甲基化、DNMT3B基因多态性与燃煤型砷中毒关系研究
目的 检测p53基因第五外显子“CCGG”序列第二个胞嘧啶(C)的甲基化状况,探讨p53基因在地方性砷中毒(地砷病)发生发展中的作用；同时检测DNA甲基化转移酶(DNA methytransferase,DNMT)DNMT3B基因启动子区-149位点C46359T单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)的情况,探讨DNMT3B启动子区-149位点SNP与地砷病易感性是否具有一定的关联. 方法 采用甲基化敏感性限制性内切酶(Methylation-sensitive restriction Endonuclease,MS-RE)-PCR法,检测118例砷中毒患者和126例正常对照p53基因第五外显子甲基化状况；采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP),检测123例砷中毒患者与126例正常对照DNMT3B启动子区-149位点SNP情况. 结果 (1)p53基因第五外显子甲基化率砷中毒组为50.85％,对照组为88.89％,砷中毒组明显低于对照组(P＜0.01)；在砷中毒不同病情组,甲基化率均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01),且随着病情加重,甲基化率有降低的趋势,但差异无统计学意义(p＞0.05)；(2)砷中毒人群DNMT3B启动子区CT杂合型频率为4.89％,TT纯合型频率为95.11％,未检出CC纯合型；对照组人群中DNMT3B启动子区CT杂和型频率为4.76％,TT纯合型频率为95.24％,未检出CC纯合型；该基因该多态位点基因型分布在砷中毒人群和对照组人群中差异无统计学意义(P＞0.05)；经性别、年龄校正,未发现-149多态位点不同基因型与罹患地砷病有关联OR=1.138(95％CI:0.309～4.198,P=0.846)；(3)根据文献报道的数据,将对照组人群与中国北部人群、美国白种人群、英国人群基因型分布进行比较,发现对照组人群与中国北部人群差异无统计学意义(P＞0.05),与美国白人、英国人比较,差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 (1)燃煤砷污染可致砷中毒组人群p53基因第五外显子低甲基化；(2)本次实验未观察到DNMT3B基因启动子区-149位点C46359T SNP与罹患地砷病存在关联；(3)对照组人群DNMT3B基因启动子区-149位点SNP与北方人群报道基因型分布一致,在该基因该位点SNP检测方面为中国人群基因库提供了基础数据.
